吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼完全双列杂交后代生长性能与肌肉营养成
2021-08-18
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Journal of Fishery Sciences of China DoI:1O.3724/SP.J.1118.2015.14326 中国水产科学2015年7月,22(4):654—665 研究论文 吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼完全双列杂交后代生长性能与肌肉 营养成分的比较 强俊 ,杨弘 一,徐跑 一,何杰 ,马昕羽2,朱志祥 ,李瑞伟 1.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室,江苏无锡214081; 2.南京农业大学无锡渔业学院,江苏无锡214182; 3.茂名市茂南三高渔业发展有限公司,广东茂名525024 摘要:以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)与奥利亚罗非鱼(0.aureus)为繁育亲本,采用完全杂交进行配组,分别 对吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼纯繁与正反交后代生长性能和肌肉营养成分进行了比较,并且研究了脂代谢相关基因 mRNA水平与肌肉脂肪含量的相关性。将初始规格基本一致的4组F1罗非鱼饲养100 d后,吉富罗非鱼纯繁组F1特 定生长率最高(P<0.05),吉富罗非鱼奥利亚正反交组合无显著差异(P>0.05),奥利亚纯繁组Fl特定生长率最低 (P<0.05)。同时,奥利亚纯繁组F1的饲料转化率、肝体比与内脏比指数显著高于其他实验组(P<0.05)。各实验组水 分、灰分与粗蛋白含量间无显著差异(尸>O.05),吉富纯繁组Fl的粗脂肪含量显著高于其他组合(P<0.05)。奥利亚纯 繁组F1的必需氨基酸、呈味氨基酸与氨基酸总含量均显著低于其他实验组(P<0.05),4组F1的肌肉必需氨基酸组成 均符合FAO/WHO的标准。吉富纯繁组F 的饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸以及n-6多不饱和脂肪 酸含量均显著高于正反交组合与奥利亚纯繁组F】 <0.05)。肌肉FAS、 O.538 7(P<0.051; 、HSL和G6PD mRNA水平与脂肪含量的 相关性分析表明,FAS与G6PD mRNA水平与肌肉脂肪含量呈负相关,相关系数 )分别为0.761 5(P<0.01)和 和HSL mRNA水平与肌肉脂肪含量呈正相关,相关系数分别为0.782 5(P<0.01)和0.562 4 (P<0.05)。研究结果表明,奥利亚纯繁组F1的生长与肌肉营养成分明显劣于其他实验组,证明杂交能够提高后代的 生长性能,改良肌肉品质,增加选育的综合效果。同时,吉富罗非鱼奥利亚正反交组合间LPL与G6PD mRNA水平 问无显著差异(P>0.05),增加肌肉脂肪含量有助于提高 凡和HSL mRNA表达水平。 关键词:罗非鱼;肌肉营养成分;脂肪酸;氨基酸;脂代谢酶 中图分类号:¥961 文献标志码:A 文章编号:1005—8737一(2015)04—0654—12 罗非鱼是中国南方各省重要的养殖经济鱼类 之一,具有出肉率高,无肌间刺,肌肉中含有多种 丰富的人体必需氨基酸与多不饱和脂肪酸。这些优 势造就了罗非鱼巨大的国际与国内市场需求。 吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)作为当前 中国主推的养殖种类,已在广东、广西、海南等 省广泛养殖。然而,近几年在养殖过程中突显出 抗病能力较差的问题,如何提高罗非鱼的抗病 力、同时保证其具有较高生长速度与出肉率成为 当前研究的重点。杂交育种是实现这个目的的最 有效也是最直接的方式。2012年我们选择了一个 遗传信息较为稳定、具有较高遗传潜力的吉富罗 非鱼家系,与抗逆和抗病性能较强的‘夏奥1号’奥 利亚罗非鱼(D.aureus)(1983年从美国奥本大学引 进,经过近20代的连续群体选育,具有明显的抗 病力与抗逆性方面的优势)进行种间杂交,通过对 收稿B期:2014—07.31;修订日期:2014—10-30. 基金项目:“十二五’’国家科技支撑计划项目(2012BAD26B03.1);现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS一49). 作者简介:强俊(1984一),男,助理研究员,博士研究生,研究方向为鱼类遗传繁殖和健康养殖.E-mail:qiangiunn@163.com 通信作者:杨弘,研究员,E-mail:Yangh@ffrc.cn;徐跑,研究员,E-mail:xup@ffrc.cn 第4期 强俊等:吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼完全双列杂交后代生长性能与肌肉营养成分的比较 655 遗传特性、杂交优势、生长与抗病以及肌肉营养成 左右时,选择规格整齐、健壮的仔鱼进行试验。 分等各方面综合比较,期望更好地评估选育效果。 在众多评价鱼肉品质的因素中,肌肉中的自 由氨基酸成分与多不饱和脂肪酸组成,以及挥发 性物质的含量主要受鱼肉来源的影响…。其中,氨 基酸组成在改善鱼肉营养成分与口感上发挥着重 要作用[2]。鱼肉脂肪中富含长链n一3多不饱和脂 肪酸,尤其是二十碳五烯酸(20:5n一3或EPA)和二 十二碳六烯酸(22:6n一3或DHA),这些脂肪酸在人 类营养需求,疾病防控以及健康促进上发挥着重 要作用p]。长链n一3多不饱和脂肪酸在人体内不 能合成,必须通过外界食物获取【4]。鱼体肌肉脂肪 酸组成受养殖品种与条件以及营养调控的影响【5]。一 些脂代谢酶,如激素敏感性脂肪酶(hormone.sen— sitive triglayceride lipase,HSL)、脂蛋白脂酶 (1ipoprteinlipase,LPL)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、葡萄糖.6一磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphate dehydrogenase,G6PD)等在脂肪酸合 成与代谢上发挥着重要作用 ]。因此,本研究拟 从吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代的 生长、肌肉氨基酸与脂肪酸组成以及脂代谢相关 酶mRNA表达水平3个方面进行分析与比较,旨 在为下一步吉富罗非鱼的良种选育和品种改良提 供理论指导。 1材料与方法 1.1试验用鱼 吉富罗非鱼取自中国水产科学研究院淡水渔 业研究中心宜兴试验基地。‘夏奥1号’奥利亚罗 非鱼取自中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 南泉试验基地。 1.2养殖条件与实验配组 2012年5月上旬,取吉富罗非鱼奥利亚罗非 鱼雌鱼各20尾、雄鱼各10尾,在4个水泥池(长× 宽×深700 cmx300 cmx150 cm,水深1O0 cm)中, 每个池子按雌雄比例2:1放人母本10尾,父本5 尾,试验设计见表1。5月22日开始出苗,4 d内, 陆续见苗。将苗捞起后分别放人4个水泥池中进 行培育。鱼苗经过15 d的强化培育,体长达2 cm 试验在12个同等规格的水泥池(500 cmx250 cmx 150 cm,水深100 cm)中进行,试验期间水泥池均 用来自同一蓄水池的流水进行水交换,日换水量 10 m ,进水口位于池的上面,出水口位于池底中 央,水流带走大部份鱼类排泄废物,并采用24 h 不间断充分增氧,以保证水体水质良好,水泥池 的水温在26~29 ̄C,pH值7.2~7.8,各水泥池的水 质条件基本一致,每个水泥池中放养120尾仔鱼。 每天投饲膨化颗粒饲料3次,投喂量为体重 6%~12%(饲料含粗蛋白质为32.0%、脂肪8.0%)。 每隔10 d每个组合随机选取l0尾鱼进行称重,调 整饲料投喂量。 表1本试验的交配设计 Tab.1 Mating design of the present study 1.3指标测量 饲养100 d后,禁食24 h,统计各养殖桶的鱼 数,每桶随机选取3O尾罗非鱼,称量完体重与体 长。随机再选取10尾鱼,用浓度为200 mg/L的 MS一222作快速深度麻醉,立即剖开腹腔,剥离出 内脏和肝合并称重。 分别按下式计算特定生长率(SGR)、饲料转化 率(FCR)、肝体 ̄g(HSI)、内脏 ̄L(VSI)、肥满度(cF): 特定生长率(SGR,%/d)=lOOx(1n ln )/f 饲料转化率(FCR,%)=(Wr-Wo)/F ̄100 肝体 ̄L(HIS,%)=1OOxWh/ 内脏 ̄t(VSI,%)=1OOxWvlWb 肥满度(CF,%)=l OOx 式中: (g)为鱼的初始均体重; (g)为鱼的终末 均体重;f(d)为饲养天数; g)为每尾鱼的平均总 摄食量(湿重); (g)为每尾鱼终末肝重;Wv(g)为 每尾鱼终末内脏重; (g)为每尾鱼终末体重; L(cm)为每尾鱼终末体长。 1.4肌肉营养测定和评价方法 每个平行另外随机选取3尾鱼,用纱布擦去 656 中国水产科学 第22卷 每尾鱼体表的水分,用手术刀割取罗非鱼背部肌 肉,低温绞碎后分装,一半用于测量肌肉一般营 氨基酸模式分别按以下公式计算氨基酸评分 (AAS)t 、化学评分(cS)和必需氨基酸指数(EAAI)tm : AAS=待测蛋白质氨基酸含量(%)/[FAO/WHO评 分模式氨基酸含量(%)] 养成分,一半用于肌肉氨基酸与脂肪酸的测定。 同时取0.1 g左右的新鲜肌肉用液氮速冻后,于 8O℃保存,用于分子生物学分析。 1.4.1 一般营养成分测定 样品在105℃下烘至 CS:待评蛋白质氨基酸含量(%)/鸡蛋蛋白质氨基 酸含量(%1 EAAI=[(1OOA/AE) ̄(IOOB/BE)×(100C/CE ̄…× (IOOJ/JE)] 式中,n为比较的必需氨基酸(EAA)数目;A,B, 恒重测定水分。采用凯氏定氮法测定样品的总氮 含量,然后将测定结果乘以6.25得粗蛋白含量: 用索氏抽提法测定粗脂肪含量;将样品在电炉上 炭化到无烟,再在马福炉中灼烧(550 ̄C)5 h测得 c,…, 为罗非鱼肌肉蛋白质的EAA含量(%, DM);AE,BE,CE….,JE为全鸡蛋蛋白质的EAA 含量(%,DM)。 1.5脂代谢酶基因定量表达 灰分含量。每一样品重复测定3次,然后求出其 平均值。 1.4.2氨基酸组成测定 样品经酸f盐酸6 mol/L) 水解后,参照JY/T019—1996的方法在高效液相色 根据GenBank中罗非鱼FAS、LPL、HSL和 谱仪(Aglient 1 100型)上测定氨基酸组成(色氨酸 须碱水解方能测出,本试验未检测)。 1.4.3脂肪酸组成测定称取约1.5 g样品+15 mL G6PD序列,设计4个基因的特异性引物,引物序 列见表2。用罗非鱼的管家基因fl-actin(EU887951.1) 作为内参,设计 .actin引物,引物序列见表2。所 有引物由上海基康生物技术有限公司合成,取罗 非鱼肌肉20 mg左右,参照RNeasy Mini Hand— book(QIAGEN公司)说明书用试剂盒提取总RNA, OD26o/OD28o为1.90左右。 混合溶剂(氯仿/甲醇=2/1,体积比)振荡提取3次, 过滤,合并滤液挥干。加2 mL O.5mol/L氢氧化钠 甲醇溶液,60℃水浴30 min。冷却,加2 mL 25%Z氟 化硼甲醇溶液,60 ̄C水浴20 min。冷却,加2 mL正 己烷和2 mL饱和氯化钠溶液,振荡萃取,静止分层。 取上层利用日本岛津(Shimadzu)GC.2010进行检测。 1.4.4 营养品质评价方法根据联合国粮农组织/ 世界卫生组织(FAO/WHO)1973年建议的氨基酸 RT-PCR与荧光定量PCR反应液的制备与反 应条件参照强俊等【llJ的方法。 1.6数据处理 在基因表达与 一actin的定量PCR扩增效率基 本一致的前提下,计算基因mRNA相对表达水 平。以罗非鱼 .actin为内参,对得到的各样品G 评分标准模式(FAO/WHO模式)和中国疾病预防 控制中心营养与食品安全所提出的鸡蛋蛋白质的 表2引物序列 Tab.2 Primer sequences 第4期 强俊等:吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼完全双列杂交后代生长性能与肌肉营养成分的比较 657 值进行均一化处理,以吉富罗非鱼自交组合F1 正交F1组合(P<0.05)(表4)。奥利亚罗非鱼自交 mRNA的表达水平为基准,应用2-zx ̄G法 ]确定 Fl的内脏重量显著小于其他3个组合F1 <0.05)。 不同组合Fl基因mRNA的相对表达量。数据结果 吉富自交与吉富和奥利亚正交F1一奥吉罗非鱼肝 用平均值4-标准差(  ̄SD)表示,试验数据用 体比指数和肥满度显著小于吉奥罗非鱼与奥利亚 SPSS15.0统计软件进行方差分析及Duncan多重比 自交Fl(P<0.05)。吉奥罗非鱼内脏比指数显著小 较。采用Excel进行基因表达水平与肌肉脂肪含量 于其他组合F】(P<0.05)。 相关性分析。显著水平为O.05,极显著水平为0.O1。 2.2吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 一般肌肉营养成分组成的比较 2结果与分析 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交F1肌 2.1吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 肉水分、灰分、粗蛋白和粗脂肪含量的测定结果 生长性能与形体指标的比较 见表5。4个组合F1肌肉水分含量介于76.71%~ 由表3可见,饲养100 d后,各试验组存活率 79.18%,粗蛋白含量介于18.48% ̄19.65%,灰分 间无显著差异 >0.05)。吉富罗非鱼的生长速度具 含量介于1.18%~1.35%,各组合F1间无显著差异 有明显优势,显著快于奥利亚罗非鱼及与其正反 0.05)。吉富罗非鱼自交F1肌肉中粗脂肪含量 交的后代(尸<0.05);两个杂交组合间的生长速度 为0.98%,显著高于吉富罗非鱼奥利亚正反交和 无显著差异( 0.05)。奥利亚罗非鱼纯繁后代的饲 奥利亚自交组合的F1(P<0.05)。 料转化率显著高于两个杂交组合(尸<O.05),与吉 2-3吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 富无显著差异( 0.05)。 肌肉氨基酸组成与营养品质评价 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼反交F 一吉奥罗非 由表6显示,4个罗非鱼交配组合F1肌肉(鲜 鱼肝脏重量显著高于吉富和奥利亚罗非鱼自交与 样)中共检测出l7种氨基酸,包含7种必需氨基酸 表3 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交后代生长性能比较 Tab.3 Comparison on growth and male ratio in offspring of self-bred and reciprocal cross of GIFT and Aurea tilapia 注:①吉富罗非鱼 ×吉富罗非鱼早为吉富罗非鱼自交;②吉富罗非鱼 ×奥利亚罗非鱼早为奥吉罗非鱼;③奥利亚罗非鱼 ×吉富罗非鱼 早为吉奥罗非鱼;④奥利亚罗非鱼 ×奥利亚罗非鱼早为奥利亚罗非鱼自交.不同上标字母表示组间差异显著(P<0.05). Note:①the offspring of self-bred between GIFT tilapiac ̄and GIFT tilapia ̄;( ̄the offspring of reciprocal cross between GIFT tilapia( ̄and Aurea tilapia ̄;@the offspring of reciprocal cross between Aurea tilapia and GIFT tilapia2;④the offspring of self-bred between Aurea tilapia and Aurea tilapia ̄.Values with different letters mean significant differences between groups(P<0.05). 表4 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交后代形体指标的比较 Tab.4 Comparison on body indices in offspring of self-bred and reciprocal cross of GIFT and Aurea tilapia 组合 肝重儋 内脏重儋 肝体比指数 内脏比指数 肥满度/% combination liver weight visceral weight hepatosomatic index viscerosomatic index condition factor 注:不同上标字母表示组间差异显著(P<0.05). Note:Values with different letters mean significant differences between groups rP<0.05) 658 中国水产科学 表5 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交后代肌肉营养组成比较 第22卷 Tab.5 Comparison on nutritional compositions in muscle in offspring of self-bred and reciprocal cross of GIFT and Aurea tilapia %(鲜重wet weight) 注:不同上标字母表示组间差异显著(P<0.05). Note:Values with different letters mean significant differences between groups rP<O.05). 表6 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交后代肌肉氨基酸含量比较 Tab.6 Comparison on contents of amino acids in muscle in offspring of self-bred and reciprocal cross of GIFT and Aurea tilapia %(鲜重wet weight) (NEEA)和4种呈味氨基酸(DAA),氨基酸总量占 组合F1。 鲜样的16.96%~19.54%;必需氨基酸总量占鲜样 的7.09%~7.99%;呈味氨基酸为6.60%~7.80%。 奥利亚罗非鱼自交F 肌肉中氨基酸含量,必需氨 由表7可知,4个罗非鱼交配组合F1中必需氨 基酸的评分均接近或大于1,其中奥利亚自交组 合在Lys和Leu的分值显著高于其他各组合F1。 基酸以及呈味氨基酸总量显著低于其他组合 F】 <0.05)。4组罗非鱼F1中必需氨基酸与呈味氨 化学评分中除Met+Cys外,各交配组合F1均大于 0.6。各组合Fl肌肉中Lys分值接近或大于1,其 中奥利亚自交F1 Lys分值显著大于其他各组合。 同时,奥利亚罗非鱼自交F1的必需氨基酸指数 (EAAI)也显著高于吉富自交F1(P<0.05)。 基酸占总氨基酸的比例之间无显著差异(尸>0.05)。 奥利亚自交组合F1肌肉中Glu,Ser,His,Arg,Ala, Tyr,Cys,Pro,Thr,Met,Phe,Ile含量均低于其他各 第4期 强俊等:吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼完全双列杂交后代生长性能与肌肉营养成分的比较 表7吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交后代肌肉必需氨基酸组成指数比较 659 Tab.7 Comparison on EAA composition in muscle in offspring of self-bred and reciprocal cross of GIFT and Aurea tilapia 卵item 艇mino酸acid G曩IF黧Ttila薹pi曼a( ̄早杰篆 麓 P O.92 O.78 1.20 O.96 O.80 1.24 O.97 0.92 1.46 as <O.05 <0.05 异亮氨酸Ile 亮氨酸Leu 赖氨酸Lys 2.50 4.40 3.40 O.91 0.77 1.19 苏氨酸Thr AAS缬氨酸Val 蛋氨酸 胱氨酸 苯丙氨酸 酪氨酸 异亮氨酸I1e 2.50 3.10 2.O.83 0.80 3 5 0.75 4 2 4 O.84 O.81 3 0.75 5 O.88 O.85 O.80 O.89 O.84 0.76 ns I1S ns 20 m 380 .:2 .93 O.97 O.95 ns O.92 亮氨酸Leu 赖氨酸Lys 0 0 O 0 0 O O ∞ 苏氨酸Thr CS缬氨酸val 蛋氨酸+胱氨酸 Met+Cys 0 O O O 0 O 0 钙 苯丙氨酸+酪氨酸 Tyr+Phe EAAI O 0 O 0 O O 0 74.0O 2.4 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 肌肉脂肪酸组成的比较 比较见图1,各交配组间存在显著差异(P<0.:3 05)。 吉富罗非鱼自交F1肌肉FAS(图la)和G6PD(图ld) mRNA水平显著低于吉奥罗非鱼与奥利亚自交Fl; 然而,LPL(图lb)和HSL(图1 c)mRNA水平显著高 O O O 0 由表8可见,4个罗非鱼交配组合F1肌肉中共 检测出18种脂肪酸,其中含6种SFA,3种MUFA 0 O 1 以及9种PUFA。各交配组F1肌肉脂肪酸中SFA, MUFA和PUFA含量存在显著差异(尸<0.05),其中 均显著高于其他各组合Fl。奥利亚自交组合;刍 F1 5 于吉奥与奥利亚罗非鱼自交F 。吉富罗非鱼奥利 "∞ 钙 亚罗非鱼正反交F1的LPL与G6PD mRNA水平 i刍 ;宝 肌肉FAS、LPL、HSL和G6PD mRNA水平 雌 ;刍 吉富罗非鱼自交F1的SFA,MUFA和PUFA含量 间无显著差异(P>0.05)。 < < 5 中SFA和MUFA含量最低,然而PUFA中的FPA 与肌肉脂肪含量的相关性分析见图2。肌肉 FAS(图2a)和G6PD(图2d)mRNA水平与肌肉脂 肪含量呈负相关,相关系数 =0.76 1 5(P<0.0 1)和 0.538 7(P<0.05)。LPL(图2b)和HSL(图2c)mRNA 和DHA含量显著高于其他组合F1。奥吉罗非鱼 的DPA含量显著高于吉奥罗非鱼(P<0.05)。吉富 罗非鱼自交F1肌肉中n一6系列PUFA含量明显高 于正反交组合与奥利亚自交组合F1(P<O.05)。各 交配组合n一3系列PUFA含量间无显著差异 fP 0.05)。 水平与肌肉脂肪含量呈正相关,相关系数分别为 =0.782 5(P<0.01)和0.562 4(P<0.05)。 2.5吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 脂代谢酶mRNA表达水平及与肌肉脂肪含量的相 关性分析 3讨论 3.1 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 生长性能与形体指标的指数比较 相同饲养条件下,4个不同交配组合Fl肌肉 FAS,LPL,HSL和G6PD mRNA相对表达水平的 本实验中,吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与 正反交组合在4 d内陆续出苗,实验开始前在相 中国水产科学 表8 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交后代肌肉脂肪酸含量比较 第22卷 Tab.8 Composition and contents of fatty acid in muscle in offspring of self-bred and reciprocal cross of GIFT and Aurea tilapia %(鲜重wet weight) 同条件下强化培育了15 d。实验中,我们选取规 格基本一致的F1进行生长性能比较,4组初始体 重介于1.19~1.22 g,因此可以排除仔鱼孵化时间 不同对实验结果的影响。 鱼。然而,奥利亚罗非鱼自交Fl的饲料转化率显 著优于吉富罗非鱼奥利亚正反交F1。吉富罗非鱼 自交组合Fl的肝体比指数小于其他组合F1,同时, 肥满度高于其他组合。奥利亚罗非鱼自交F1的肝 体比和内脏比指数均最高,而肥满度最小。 3.2吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 一养殖100 d后,吉富罗非鱼自交F1遗传了亲 本生长速度快的优势,特定生长率显著高于吉富 罗非鱼奥利亚罗非鱼正反交F1和奥利亚自交组 合。吉富罗非鱼于2006年从马来西亚的世界渔业 中心引进,并在淡水渔业研究中心的宜兴试验基 般肌肉营养成分组成的比较 本实验中,养殖环境与饲料营养均相同,因 而养殖后代中肌肉营养成分的差异主要来自遗传 效应。由表5可知,吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自 交与正反交后代肌肉水分、粗蛋白和灰分含量间 无显著差异。然而,4组F1的粗脂肪含量存在显著 地进一步选育了6代,各方面的性能指标均有明 显提高。陈林等[1 3】在对不同罗非鱼生长比较中也 发现,新吉富罗非鱼的绝对增重率>吉奥罗非鱼 (新吉富罗非鱼早×奥利亚罗非鱼 )>奥利亚罗非 差异。以吉富罗非鱼作为父本的吉富罗非鱼自交 中国水产科学 第22卷 和吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼正交F1一奥吉罗非鱼, 5种罗非鱼中,红罗非鱼 niloticus×0.mossamoieus) 肌肉中粗脂肪含量显著高于以奥利亚罗非鱼作为 父本的吉奥和奥利亚罗非鱼自交F1。父本效应、 母本效应、父母本交互作用效应在鱼体遗传效应 中发挥着重要作用,肌肉中脂肪含量的调控是否 由父本效应所调控,下一步我们将对这方面展开 深入的研究。 3.3 吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 肌肉氨基酸组成与营养品质评价 本实验所检测的肌肉17种氨基酸中,奥利亚 罗非鱼自交Fl肌肉氨基酸成分中,除Pro含量显 著较高外,其他氨基酸成分均低于或显著低于吉 富罗非鱼自交与吉富和奥利亚罗非鱼正反交F1。 同时,吉富罗非鱼自交与吉富和奥利亚正反交F 的EAA值介于7.93~7.99,显著高于奥利亚自交 F1的7.09。吉富罗非鱼自交F1与奥吉罗非鱼的 EAA值也显著高于养殖刀鲚的EAA值,EAA值与 鱼肉的营养价值密切相关,说明这两种罗非鱼的 肉质营养优于养殖刀鲚[10]。4个交配组合F1的 AAS均接近1或大于1,说明这4组F1罗非鱼肌 肉氨基酸含量符合FAO/WHO的标准,适合人体 需求L1 。采用CS评价中,肌肉中Val和Met+Cys 含硫氨基酸略显缺乏,这可能与所摄食的食物中 含硫氨基酸不足有关Il 。 鱼肉的鲜美程度很大程度上取决于呈味氨基 酸(DAA)的含量 。刀鲚味道鲜美,野生和养殖 刀鲚的DAA分别占鲜重的6.1%和6.7%[10]。本研 究中发现,吉富罗非鱼自交与吉富和奥利亚罗非 鱼正反交F1 DAA含量介于7.23%~7.80%,说明这 3个品种罗非鱼肉质口感优于刀鲚。同时,17种氨 基酸分析表明,Glu含量最高,Cys含量最低,这与 其他硬骨鱼如兰州 ̄i(Silurus lanzhouensis)[18】、刀 鲚¨们、翘嘴红鲐【14]和湘华鲮(Sinilabeo decorus tungting)¨9]等肌肉氨基酸含量高低顺序基本一致, 说明硬骨鱼类在进化过程中肌肉水解氨基酸的种 类具有较大的保守性。Glu不仅是重要的鲜味氨 基酸之一,而且参与脑组织生化代谢与多种生物 活性物质合成ll 】。不同品种或品系的罗非鱼,肌 肉Glu含量存在较大差异。郝淑贤等[2 Uj研究发现, 的Glu含量为2.58>尼罗罗非鱼的2.41>奥利亚罗 非鱼的2.38>吉富罗非鱼的2.33>奥尼罗非鱼的 2.11。本实验中的亲本为优化选育6代的吉富罗 非鱼和‘夏奥1号’奥利亚罗非鱼,其亲本品质与 遗传特性的差异可能影响了F 肌肉氨基酸组成。 吉富罗非鱼自交F1、奥吉和吉奥罗非鱼肌肉Glu 含量分别为3.07、3.4l和3.07,显著高于野生刀 鲚的2.66㈣;翘嘴红鲔的2.04~2.625[H ;半滑舌 鳎的1.17~1.26以及奥利亚罗非鱼自交F1的2.84。 由肌肉氨基酸组成、EAA、DAA和TAA含量,我 们可以推测出父本吉富罗非鱼对子代肉质改良有 一定作用,杂交可以改良奥利亚罗非鱼肌肉品质。 由表7中可以看出,4个交配组合F】的 EA TAA比值介于0.406~0.415,这与李世杰等[ ] 报道的吉富罗非鱼EAA/TAA比值0.424和奥尼罗 非鱼的比值0.433较为接近,比值均高于普通蛋 白质的O.4正常比值n引。氨基酸平衡效果较优,属 于优质的人体所需的蛋白质,人体氨基酸含量与 平衡对维持防御和神经肌肉功能方面特别重要。 然而,本实验所检测4个组合F 的肌肉氨基酸含 量基本高于郝淑贤等【2UJ对部分罗非鱼肌肉的检测 结果。罗非鱼肌肉氨基酸组成可能与养殖品种、饲 养条件以及饲料营养组成有较大关系l5]。 3.4吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼自交与正反交后代 肌肉脂肪酸组成的比较 脂肪酸是加热产生香气成分的不可缺少的物 质,尤其是高含量的PUFA能显著地增加香味, 同时可以在一定程度上反映肌肉的多汁性【l引。同 一群体肌肉脂肪酸组成与饵料中脂肪源、季节、 水温、水体理化因子、光照等密切相关。然而,不 同群体的鱼类,遗传与环境因子对肌肉的品质参 数有显著影响 。本研究中,4个交配组合F1的 n一3系列PUFA之间无显著差异,然而吉富罗非鱼 自交F1在SFA、MUFA和PUFA以及n一6系列 PUFA含量均显著高于吉富罗非鱼奥利亚罗非鱼 正反交和奥利亚自交Fl,这可能与吉富罗非鱼的 遗传特性以及其对饲料中植物油消化吸收能力较 强有关。人工配合饲料中添加的植物油含有相对 第4期 强俊等:吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼完全双列杂交后代生长性能与肌肉营养成分的比较 663 丰富的亚油酸(C18:2n一6)【2引。奥利亚罗非鱼自交 Fl的SFA、MUFA和PUFA含量最低,然而与吉 富罗非鱼杂交后,杂交Fl的肉质得到改良,SFA、 MUFA和PUFA含量均有所提高,但都没有超过 吉富罗非鱼自交F 。因此,我们下一步的研究方 向将着重于吉富罗非鱼父本对子代脂肪酸遗传特 性的影响。 FAS、LPL、HSL和G6PD是脂肪合成与代谢 途径的关键酶。FAS和G6PD在动物体脂生成、 沉积中发挥着重要作用【2 。本研究中发现肌肉 脂肪含量较高的F1组中,肌肉FAS和G6PD mRNA 水平相对较低,相关性分析表明,肌肉脂肪含量 与FAS和G6PD mRNA水平均呈负相关,相关系 数分别为尺 =0.761 5(P<0.O1)和0.538 7(尸l<0.05)。相 对较高的肌肉脂肪含量可能会抑制FAS和G6PD 酶的活性,降低表达丰度,体内不需要合成大量 的脂肪酸来参与肌肉脂肪的合成与沉积 ]。LPL 和HSL作为调控脂肪代谢的关键酶,肌肉脂肪含 量相对较高组LPL和HSL mRNA水平相对较高, 与肌肉脂肪含量呈正相关,相关系数分别为 =O.782 5(P<0.01)和0.562 4(P<0.05),较高的 LPL和HSL mRNA水平有助于从头合成甘油三酯 提供脂肪储备或氧化分解为肌肉活动提供能量。 参考文献: Fuentes A,Fem ̄mdez—Segovia I,Escriche I,et a1.Compari— son of physico—chemical parameters and composition of mussels(Mytilus galloprovincialis Lmk.)from different Spanish origins[J].Food Chem,2009,1 12:295—302 【2】 Fuentes A,Fernandez—Segovia S,Serra J A,et a1.Compari・ son of wild and cultured sea bass(Dicentrarchus labrax) quality[J].FoodChem,2010,119:1514—1518. 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Crude lipid content of pure—bred GIFT tilapia progeny was significantly higher than that of other groups.Total amino acids,essential amino acids,and dispensable amino acids of pure—bred O.aureus progeny were significantly lower than other groups.The rate of essentia1 amino acid formation in four F1 generations was consistent with FA0,WHO stan. dards.Saturated,single unsaturated,polyunsaturated,and n一6 polyunsaturated fatty acids of pure.bred GIFT tilapia progeny were significantly higher than those of the two hybrids and the pure-bred progeny of O.aureus.Correlation analysis showed a negative relationship between muscle crude 1ipid content and mRNA levels of FAS =0.761 5: P<0.01)and G PD =0.538 7:P<0.05).In contrast,crude lipid content was positively correlated with mRNA levels of 咒 =0.782 5;P<0.01)and HSL =0.562 4,P<0.05).Overall,the results indicated that the growth nd anutri. tional composition of muscle of pure—bred O.aureus progeny were significantly 1ower than of GIFT tilapia or hybrids. Thus,hybridization may increase growth performance of offspring and improve meat qualiy,as twell as enhancing the efrect of selective breeding.Although there were no sinifgicant differences in mRNA levels of三P and G6:PD between he ttwo hybrids of GIFT tilapia.higher muscle crude ipid content may amplify mRNA levels of LPL and HSL. Key words:tilapia;nutritional composition of muscle;amino acids;fatty acids;1ipid metabolism enzyme corresp0nding author:YANG Hong,E—mail:yangh@ffrc.cn;xu Pao,E—mail:xup@ffrc.cn