HPLC法测定格列齐特缓释胶囊的含量和有关物质

第ｌ９卷１期　天津医科大学学报　Ｖ０１．１９．Ｎｏ．１　２０１３年１月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｊａｎ．２０１３　５５　药性问题提供了新思路。目前已经发现多种具有不　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ。２００７．５９（６）：１２６１　同作用机制的外排泵抑制剂，但是许多在体外活性　［４］张海旺，邓旭明，任晓慧．主动外排系统介导的大肠杆菌多重耐　良好的外排泵抑制剂由于安全性、特异性、机制明　药性的确ｉｌＥ［Ｊ］．中国兽医学报，２００５，２５（２）：１７３　［５］卓超，苏丹虹，倪语星，等．２００９年中国ＣＨＩＮＥＴ大肠埃希菌和　确性等诸多问题未能用于临床治疗。因此，寻找有　克雷伯菌属细菌耐药性监测『Ｊ］．中同感染与化疗杂志，２０１０，１０　应用前景的外排泵抑制剂对于细菌性感染的治疗　（５）：３２５　有着深远的意义。　［６］Ｐａｉｘａｏ　Ｌ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ　Ｌ，Ｃｏｕｔｏ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　参考文献：　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ｅｆｉｆｕｘ　ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｄ　Ｅｎｇ，　［１］Ｈｉｇｇｉｎｓ　Ｃ　Ｆ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｆｏｒ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓ－　２００９，３：１８　ｔａｎｃｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４６（７１３７）：７４９　ｌ７　Ｊ　Ｎａｇａｎｏ　Ｋ，Ｎｉｋａｉｄｏ　Ｈ．Ｋｉｎｅｔｉｃ　ｂｅｈａｖｉｏｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｍｕｌｔｉｄｕｒｇ　［２］　Ｂｌａｉｒ　Ｊ　Ｍ，Ｐｉｄｄｏｃｋ　Ｌ　Ｊ．Ｓｔｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＮＤ　ｅｆｉｆｕｘ　ｐｕｍｐ　ＡｃｒＢ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，　ｅｆｆ］ｕｘ　ｐｕｍｐｓ　ｉｎ　Ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ：ａｎ　ｕｐｄａｔｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｏｐｉｎ　２００９　１０６（１４）：５８５４　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，１２（５）：５１２　［８］Ｚｈａｎｇ　Ｚ，Ｌｉｕ　Ｚ　Ｑ，Ｚｈｅｎｇ　Ｐ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｆｆｌｕｘ　ｐｕｍｐ　ｉｎ－　［３］Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ　Ａ，Ｔｒｉｔｔｌｅｒ　Ｒ，Ｂｏｈｎｅｒｔ　Ｊ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｃｃｎｍｕ—　ｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｄｕｒｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｏｒ　ｐｙｌｏｒｉ［Ｊ１．　ｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ，Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ　ｆｅｕｎｄｉｉ　ａｎｄ　Ｅｎ—　Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ　２０１０，１６（１０）：１２７９　ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ：ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｅｍｅｘ　ｐｕｍｐ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎ一　（２０１２—０９—２１收稿）　文章编号１００６—８１４７（２０１３）０１—００５５—０３　论曩　著・　ＨＰＬＣ法测定格列齐特缓释胶囊的含量和有关物质　许煜静，张庆伟，彭秋燕，李翔字，郝旖，杨金荣　（天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津３０００７０）　摘要目的：建立格列奇特缓释胶囊的含量和有关物质测定的ＨＰＬＣ分析方法。方法：色谱柱Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ８（４．６　ｍｉｎＸ　１５０　ｉｎｒＩｌ，５　ｍ），流动相乙腈一水一三乙胺一三氟乙酸（３９：６１：０．１：０．１），检测波长２３５　ｎｍ，流速１．０ｉｎＬ・ｉｎｉｎ一，柱温３５℃。结果：格列　齐特在８０．０８～３２０．３２　ｇ・ｍＬ　ｒ＝０．９９９　８）浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率１００．４３％，ＲＳＤ＝０．３４％（ｎ＝９）。检　测限８．７６　ｎｇ，格列齐特主峰与其有关物质及其分解产物均能达到有效的分离。３批样品含量和有关物质均符合要求。结论：该方　法专属性强，结果准确可靠，可用于格列齐特缓释胶囊的含量及其有关物质测定。　关键词格列齐特缓释胶囊；ＨＰＬＣ；含量测定；有关物质　中图分类号Ｒ９２７．２　文献标志码Ａ　格列齐特为第二代磺酰脲类口服降糖药，主要　量测定和有关物质测定方法［５１，色谱条件优化后应　作用于胰岛Ｂ细胞，能显著地降低血糖水平，恢复　用于格列齐特缓释胶囊含量和有关物质的测定，结　胰岛素生理性的分泌模式，并通过提高胰岛素对靶　果表明该方法专属性强，结果准确可靠，可有效控　组织的敏感性，改善胰岛素抵抗　。缓释微丸胶囊　制药品质量。　是一种新剂型，属剂量分散型剂型，与单剂量剂型相　１材料与方法　比，能够迅速分布于整个胃肠道，使生物利用度提　１．１仪器与试药　高并减小局部刺激，提高患者服药的依从性ｌ　４ｌ。中　１．１．１仪器美国Ｗａｔｅｒｓ公司２４８７双波长紫外检　国药典２０１０年版二部收录了格列齐特片（规格为　测器高效液相色谱仪，色谱柱Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ８（４．６ｘ　８０　ｍｇ／片）的质量标准，未收录格列齐特缓释制剂。　１５０　ｍｍ，５　ｍ，Ａｇｉｌｅｎｔ公司）。　本文参考中国药典２０１０年版二部格列齐特片的含　１．１．２试药格列齐特原料药（宁波利民康药业有　限公司，批号２０１１０１），格列齐特对照品（中国药品　作者简介许煜静（１９８８一）。女。硕士在读。研究方向：药剂学；通信作　生物制品检定所，批号２０１００４），ｌ一（３一氮杂双环　者：杨金荣。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｊｉｎｒｏｎｇ＠ｔｍｕ．ｅｄｕ．０１３。　ｆ３．３．０】辛基）一３一邻甲苯磺酰脲（格列齐特杂质Ｉ，中　５６　天津医科大学学报　同食品药品检定研究院，批号２０１１０１），格列齐特　缓释胶囊（３批，自制，批号２０１２０４０１，２１０２０４０４，　２０１２０４０６），乙腈、　氟乙酸（色谱纯，Ｊ＆Ｋ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ　Ｈ＇Ｄ），■乙胺（分析纯，Ｊ＆Ｋ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ　ＬＴＤ）。　１．２　方法　１．２．１　色谱条件与系统适用性实验　色谱柱Ｅ—　ｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ８（４．６×１５０　ｍｉＩｌ，５　ｍ），柱温３５　，流　动相乙腈一水一　乙胺一三氟乙酸（３９：６１：０．１：Ｏ．１），流　速１．０　ｍＬ・ａｒｉｎ～，进样量２０　Ｌ，检测波长２３５　Ｉｌｍ。　分别精密量取格列齐特供试品和格列齐特杂质Ｉ　对照品适量，用４０％乙腈溶液配制成含格列齐特　０．２　Ｐ－ｇ・ｍＬ　和格列齐特杂质１　０．３　ｇ・ｍＬ一的溶液，　作为系统适应性试验溶液。取该溶液２０　ｌ　进样，　在该色谱条件下，理论塔板数按格列齐特主峰计算　不低于３　０００，格列齐特色谱峰与格列齐特杂质Ｉ　色谱峰的分离度应符合要求。　１．２．２溶液的制备　１．２．２．１供试品溶液Ｉ：取本品内容物研细，精密称　取粉末适量（约相当于格列齐特１００　ｍｇ），置１００　ｍＬ　量瓶中，加乙腈４０　ｍＬ，超声溶解１５　ｒａｉｎ，加水稀释　至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液Ｉ，　１．２．２．２自身对照溶液：精密量取供试品溶液Ｉ　２ｍＩ　，　置１（）０ｍＬ量瓶中，用４０％乙腈溶液稀释至刻度，摇　匀，精密量取５　ｍＬ，置５０　ｍＬ量瓶中，在４０％乙腈溶　液稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。　１．２．２．３供试品溶液Ⅱ：精密量取供试品溶液Ｉ　５　ｍＬ，　置２５　ｍＬ量瓶巾，用４０％乙腈溶液稀释至刻度，摇　匀，作为供试品溶液Ⅱ。　１．２．２．４对照品溶液：精密称取格列齐特对照品约　２０　ｍｇ，置１００　ｍＬ量瓶巾，加乙腈４０　ｍＬ，超声溶解　后，加水稀释至刻度，摇匀。　１．２．３专属性考察　１．２．３．１空白辅料十扰试验：称取格列齐特缓释胶　囊全辅料适量，照１．２．２．１项下方法配制，在　述色　谱条件下进样２０　Ｌ，记录色谱图。另分别精密量取　供试品溶液Ⅱ和对照品溶液进样，记录色谱图。　１．２．３．２破坏性试验：（１）酸破坏：称取相当于格列　齐特１００　ｍｇ的供试品粉末，置于１００　ｍＬ量瓶中，加　入０．Ｏ１　ｔｏｏｌ・Ｌ　的盐酸１０　ｍＬ，在８０　水浴巾加热　３０　ｌｎｉ１１后，冷却，酸破坏溶液用０．１　ｔｏｏｌ・Ｌ　的氢氧　化钠溶液调至中性。（２）碱破坏：称取相当于格列齐　特１００ｍｇ的供试品粉末，置于１００ｍＬ量瓶ｒｆ１，加入　０．１　ｔｏｏｌ・Ｌ　的氢氧化钠溶液１０　ｍＬ，在１００℃水浴中　６０　ａｒｉｎ后，冷却，用０．１　ｍｏｌ・Ｌ　的盐酸调节至中性。　（３）氧化破坏：称取相当于格列齐特１００　ｍｇ的供试　品粉末，置于１００　ｍＬ量瓶中，加入０．３％的双氧水　１０　ｍＬ后，在８０　水浴中３０　ｒａｉｎ后，冷却。　上述酸、碱、氧化破坏溶液，照１．２．２．１项下“加　乙腈４０　ｍＬ……”起，制备供试溶液，取２０　１．注入　液相色谱仪，记录色谱图。　１．２．４线性关系和范　精密称取格列齐特对照品　１Ｏ０．０　ｍｇ，同１．２．２．４项下配制方法，配制成１．００　ｍｇ・　ｍＴ　。。储备液。精密量取对照品溶液储备液２．０、３．５、　５．０、６．５和８．０　ｍＬ用４０％乙腈溶液稀释至２５　ｍＬ，摇　匀，在上述色谱条件下进样２０　ｌ｜，测定峰面积，绘　制标准曲线。　１．２．５精密度取浓度约为２００　ｇ・ｍｌ　的供试【ｌＩＪｌ『　溶液连续进样６次，每次２０　，测定精密度　１．２．６　回收率测定　分别精密称取格列齐特８０、　１００和１２０　ｍｇ，置１００　ｍ１　量瓶中，用４０　ｒｎＬ乙腈趟　声溶解，再分别加入相当于１Ｏ０　ｍｇ处方量的辅料粉　末，加水稀释至刻度，摇匀。分别移取５　ｒｎＩ．，置２５　ｕ　Ｉ　量瓶巾，用４０％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀。过滤后　分别进样２０　ｌＪ’记录峰面积，计算回收半　１．２．７稳定性考察　１．２．７．１　含量测定稳定性考察：取供试品溶液Ⅱ，　温放置，分别于０、２、４、６、８、２４ｈ时进样，记录色谱冈、　１．２．７．２有关物质稳定性考察：取供试品溶液Ｉ，　拳　温放置，分别于０、２、４、６、８、２４ｈ时进样，　录色谱Ｉ割．　．１．２．８检测限取自身对照溶液作为储备液，逐步　稀释，在上述色谱条件进样２０　Ｉ　，测定检测限　１．２．９含量测定取样品３批，照１．２．２．３项Ｆ　法　制备，并取对照品溶液，存上述色谱条件下分别进　样２０　Ｌ，测定峰面积。用外标法计箅含量。本品含　格列齐特应为标示量的９３％～１０７％　。　１．２．１０有关物质测定取样品３批，照１．２．２项　供试品溶液Ｉ和自身对照溶液配制方法制备，分别　进样２０　Ｌ，以外标峰面积不加校正【大１子主成分ｆＪ　身对照法计算有关物质相对含量。单个杂质峰面积　不得大于白身对照溶液主峰面积，各杂质峰面积的　和不得大于自身对照溶液主峰面积的２倍Ｉ　２结果　２．１　色谱条件与系统适用性试验　系统适川性试　验结果表明，在１．２．１项色谱条件下，格列齐特色谱峰　与格列齐特杂质Ｉ色谱峰的分离度为１．９８。　ｌ　２．２专属性考察　２．２．１　空白辅料十扰试验结果表明，空　辅料小　于扰格列齐特的测定。　图２　２．２．２破坏性试验样品溶液的酸、碱、氧化破坏　色谱网与未破坏图比较，结果　爪，各条件下的降　第１期　许煜静，等．ＨＰＬＣ法测定格列齐特缓释胶囊的含量和有关物质　５７　解产物和本品主峰均能达到完全分离。　２　１　５．Ｏ　ｌ０．０　ｔ／ｍｉｎ　图１系统适用性实验（１格列齐特，２格列齐特杂质Ｉ）　Ｉ　。　－　０　０　Ｉ　５．０　１０．０　空白辅料　＾ｌ　５．０　ｌ０．０　５．０　１０．０　ｔ／ｍｉｎ　供试品　对照品　图２空白辅料干扰试验结果【１格列齐特）　５．０　２０．０　５．Ｏ　１０．０ｔ／ｍｉｎ　未破坏　酸破坏　Ｌ　１０．０　２０．０ｔ／ｍｉｎ　碱破坏　氧化破坏　图３破坏性试验结果（１格列齐特）　２＿３线性关系和范围　以浓度为横坐标，峰面积为　纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为ｙ＝４４　８４６ｘ＋　１３４　５３９，相关系数ｒ＝０．９９９　８，结果表明格列齐特在　８０．０８～３２０．３２　Ｉ，ｚｇ・ｍＬ　浓度范围内，线性关系良好。　２．４精密度精密度考察结果的ＲＳＤ值为０．１０％　（　：６），表明精密度良好。　２．５回收率格列齐特的回收率为１００．３７％，ＲＳＤ　为０．５４％，符合方法学要求。见表１。　２．６稳定性　２．６．１含量测定稳定性格列齐特峰面积ＲＳＤ值　为１．０１％，表明格列齐特在２４　ｈ内稳定。　２．６．２有关物质稳定性结果显示总杂质峰面积　在０—６　ｈ内ＲＳＤ＜２％，６　ｈ后ＲＳＤ＞２％，因此在有　关物质检查时样品溶液应临用现配，不能超过６　ｈ。　表１含量测定的回收率考察结果　２．７检测限经过多次稀释，格列齐特的检出限为　８．７６　ｎｇ。　２．７样品含量测定和有关物质测定样品含量和　有关物质测定结果见表２。　表２格列齐特含量和有关物质测定结果　３讨论　３．１有关物质测定的方法学研究中，总杂质在６　ｈ　内基本稳定，杂质峰以格列齐特杂质Ｉ变化最为明　显，但６　ｈ内均未超过０．２％的限量，可以认为基本　稳定。因此采用本方法测定格列齐特缓释胶囊的有　关物质时，样品溶液需临用现配。　３＿２在酸、碱、氧化破坏实验过程中发现格列齐特　经过同样浓度酸、碱破坏后，在碱性溶液中较稳　定，在酸性溶液中不稳定，主成分峰减小太多；氧　化条件剧烈时，主峰甚至消失，失去破坏性试验意　义，提示本品易氧化分解。本文调整盐酸的浓度至　０．０１　ｍｏｌ－Ｌ　和双氧水浓度至０．３％时，使其适度降　解（１０％　２０％），主峰与降解物或降解物间分离度良　好；通过试验发现加热破坏的程度远远小于酸、碱、　氧化破坏的程度。　参考文献：　［１］　吴德云，陈明卫．格列齐特缓释片对胰岛素抵抗和胰岛Ｂ细胞　功能的影响［ＪＩ＿实用糖尿病杂志，２００９，１（２）：３７　［２］　丁平，查伟．格列齐特缓释片治疗２型糖尿病的临床研究近况　［Ｊ『．实用中西医结合临床，２００７，７（５）：９２　［３］苏红丽．格列齐特缓释片治疗老年２型糖尿病的疗效与安全性　观察ＩＪＪ＿中国现代药物应用，２０１２，６（２）：４８　［４１张蓉，方瑜，曹德英．格列齐特缓释微丸胶囊的制备及体外释放　度考察『ＪＪ．制剂技术，２００６，ｔｓ（１０）：２７　［５］国家药典委员会．中国药典［Ｓ］．二部．北京：中国医药科技出版　社，２０１０：８１０—８１　１　（２０１２—０９—１８收稿）