甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量

甲醛滴定法测定氨基酸含量

一、目的

掌控甲醛滴定法测量氨基酸含量的原理和操作方式要点二、原理

水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的―n+h3结合，形成―nh―ch2oh、―n(ch2―oh)2等羟甲基衍生物，使n+h3上的h+游离出来，这样就可以用碱滴定n+h3放出h+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

若样品中只所含单一的未知氨基酸，则可以由此法电解的结果算是出来氨基酸的含量。若样品中所含多种氨基酸（例如蛋白质水解液），测无法由此法求出氨基酸的含量。

脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。三、材料、试剂与器具（一）试剂

1、1%酚酞酒精溶液

称1g酚酞溶于100ml95%酒精中。2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液

挑0.5溴麝香草酚蓝溶100ml20%乙醇溶液中。3、氨基酸溶液

4、标准0.100mol/l氢氧化钠溶液

5、中性甲醛溶液

取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol/lnaoh溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。（二）实验器具

1、锥形瓶2、碱式滴定管

3、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤

1、挑3只50ml锥形瓶，按下表中重新加入试剂。锥形瓶编号试剂氨基酸溶液或样品（ml）蒸馏水（ml）中性甲醛溶液（ml）0.05%溴麝香草酚蓝溶液（几滴）1%酚酞乙醇溶液（几滴）1.05.05.0221.05.05.022―6.05.022样品1样品2空白2、搅匀后用标准0.100mol/l氢氧化钠溶液电解至紫色（ph8.7~9.0）

3、结果计算

氨基酸溶液中不含氨基酸的百分比浓度为

c=（v1-v2）×c0×氨基酸分子量/（10×v样）式中：c：总酸含量（g/100ml）

v1为电解样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）；v2为滴空白消耗氢氧化钠的体积

（ml）；c0：标准氢氧化钠精确浓度(mol/l)v样：样品体积(ml)

4、氢氧化钠标准溶液的标定

五、注意事项

（1）利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。

（2）氨与甲醛反应方程

①铵根与甲醛反应生成六次甲基四胺盐及强酸：

（氨的部分电离产生少量铵根，但由第二个反应大量消耗铵根后，氨电离方程就猛烈地偏向右边了）

②反应生成的六次甲基四胺盐及3个氢离子都可以跟碱反应，而溶液中正好有还未反应

的

氨

水

，

因

而

第

二

个

反

应

，

中

和

反

应

发

生

(ch2)6n4h++nh3=(ch2)6n4+nh4+h++nh3=nh4+

这第二组反应就是一个放出中和冷的过程，所以溶液就冷出来。这里分解成的铵盐又重复第一组甲醛弱酸化的反应，一直在①和②之间循环，直到氨被中和和转变回去，理论上谈，最终的音速结果必须就是略呈圆形微碱性的六次甲基四胺。