食品中沙门氏菌快速检测方法的研究

食品中沙门氏菌快速检测方法的研究

作者：刘宇

来源：《科学与财富》2016年第23期

摘 要：沙门氏菌（Salmonella）是一种常见的病原菌，作为温血和冷血动物的肠道菌，分布范围十分广泛，它经污染食品传播，能在人类肠道中迅速繁殖，侵入肠粘膜组织，产生肠毒素，导致发热、腹痛、腹泻等全身症状，严重者出现败血症，由沙门氏菌引起的食物中毒一直占世界食物中毒病例前列。近年来，沙门氏菌食物中毒和动物感染沙门氏菌十分严重。由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎在世界各国有增加的趋势，已成为国际公共卫生的一个重要课题。本文主要针对食品中沙门氏菌快速检测方法进行分析和讨论。 关键词：食品；沙门氏菌；快速检测；检测方法

近些年来， 为了控制和预防某些细菌感染， 在饲料添加剂及治疗中常盲目使用一些抗菌药物， 导致产生许多耐药菌株，像沙门氏菌就属于此类细菌。一般情况下，在肉类食品、奶制品以及蛋制品中出现沙门氏菌污染的情况较多，而这些均是人们日常生活中食用较多的食品种类，因此，必须要加大对食品致病菌安全检测工作的力度，寻找更加敏感和准确的沙门氏菌检测剂。

1 食品中沙门氏菌快速检测重要性

沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性，对营养要求不高，耐胆盐，对外界的抵抗力较强。感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒。带菌者，或是感染沙门菌人的粪便会在一定程度上污染食物，导致人体食物中毒。沙门菌极易导致人体发生细菌性食物中毒，主要表现有败血症、肠胃炎以及肠伤寒等，而且具有一定的传染性，可以通过消化道致病。沙门菌就从数量上来说是世界上比较常见的细菌种类之一，在我国，食物中毒问题中首要的也是由于沙门菌而产生的中毒问题，人类受到细菌感染的主要的来源也是受到沙门菌污染的相关食品，如：肉和奶等，因此食品、医疗卫生以及商检等部门对沙门菌的检测是相当严格。沙门氏菌中毒常常是大面积的，致病速度快，给人类健康带来极大威胁。繁杂的各类生化反应型，使常规检验程序复杂繁琐、耗时费力，不仅给检验部门带来沉重的负担，而且还使产品运转和仓贮的时间延长，费用增加。提高检测技术是有效控制该菌的重要手段，尤其是大面积普查时更需要快速简便的检测方法。沙门菌污染的快速检测，一方面有利于减少食物中毒和保证食品卫生，另一方面有利于及早地发现传染源，并有效的阻断其传播途径。目前对沙门氏菌的治疗为大量使用或滥用抗生素，从而忽视了对传染源和传播途径的综合防控，因此对沙门氏菌分离株耐药性的监测是意义重大的。 2 快速检测沙门氏菌的方法

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国标法鉴定结果准确可靠是公认的，但因沙门氏菌血清型种类多，生化特异性大，使得检验程序更加复杂，检验过程需要反复的接种培养，一般都需要4～7天才能出结果。PCR技术筛选样品中致病菌的检测系统之一，优点在于特异性强，假阳性低，耗时短，从增菌到检测48h内可出检验结果。在已知阳性可能性很高的情况下，适量增加分离平板数和提高划线质量，着重对可疑菌进行检测，有效提高检测效率。 2.1 Transia法

沙门氏菌，最快的速度，操作时间可以缩短每个检测。它是基于双抗体夹心ELISA法中，使用的抗体的混合物，以确保所有沙门氏菌血清型的检测。固态反应是一种微量反应板的有形或无形的条纹。特异的单克隆抗体用于沙门氏菌，收拾锁孔。小在第一阶段（沙门氏菌特异的单克隆抗体及多克隆抗体的混合物）与复杂的样品和抗体。延时，沙门氏菌抗原和抗体包被的，以形成复合材料接头组件：单克隆抗体沙门氏菌抗原-抗体。洗涤后，每孔为底物溶液（过氧化脲）和显色溶液（四氨基甲基苯），以显示复合酶催化氧化显色，蓝色。加入反应终止液终止催化反应后，将反应混合物酸化，从蓝色到黄色的颜色变化。

ELISA方法可用于选择性富集和热冲击的效果，沙门氏菌抗原特异的食品和环境样品的释放。如使用李Zhaogun的样品制备方法，可大大缩短检测时间，此方法可以在没有酶标仪在实验室条件下，从这个角度来看，ELISA微孔板Transia沙门氏菌板检测方法的LiZhaogun（Salmonellatest1更适合于一般实验室使用）免疫反应卡。 2.2 沙门氏菌Transia单，夹心免疫反应检测方法

膜带固相反应，包括抗沙门氏菌抗体染色染料共轭垫浸泡，抗沙门氏菌抗体固定膜反应区。浓缩，浓缩液移样孔管，其吸收，如沙门氏菌抗原的存在的样品，它们的效果和偶联物，抗体，然后移动到膜的结合被固定在膜反应区，显示在响应窗口的色带。最后，结果可以读取在5-7分钟。该方法也适用于非酶标记仪器实验室。样品的制备方法，例如作为使用李Zhaogun，可以缩短检测时间，可以在实验室条件下进行。 2.3 实时荧光定量技术

实时荧光定量PCR技术是近年来广泛应用于沙门氏菌快速检测的一种方法。采用TaqManPCR扩增沙门氏菌D型菌株特有的sefA基因，使用该方法与常规培养法对经过同质加工处理的鸡蛋样本进行检测，其结果与常规培养法获得的结果100%一致。但是该方法只需要2天，而常规方法需要5天，而且在鸡蛋样本中的灵敏度为1CFU/600g，大大提高了低样本量检测效率。国内，李光伟等建立了快速、敏感、特异以及准确定量检测沙门氏菌的FQ.PCR方法。采用沙门氏菌高度保守序列fimY，设计特异性引物和探针，通过对反应体系和条件的优化，然后进行特异性和适用性实验。结果表明用FQ.PCR方法和国标法检出的阳性样本数和检出率基本一致，准确率达99.17%。该FQ.PCR检测试剂可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域。建立的实时荧光PCR检测方法耗时约2h，是一种快速的检测方法。

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通过检测患者肛拭子标本，发现该方法对没有经过增菌的标本检测效率和经过增菌的检测效率完全一致，而且灵敏度较高，在减少标本增菌时能明显提高检测阳性率。这一方法可以大大缩短报告结果的时间，快速鉴定突发性食物中毒事件中的病原体。基于inv基因簇设计的引物具属特异性，可用于鉴别沙门菌，尽管与极少数沙门菌菌株缺少invA基因的实验结果有矛盾，但通过检查invA基因来确定沙门菌的存在已经成为共识。 结束语

食品安全不仅关系到人们的生命健康，而且关系到社会的稳定和谐。随着社会饮食安全问题的频繁出现，食品安全成为了人们的重要关注点。国家也进一步加强了对食品市场的整治力度，以提高食品安全，从而为人们提供一个安全的生活环境。虽然目前用于检测沙门氏菌的方法都有优点和缺点，但随着科技的发展，人们探索，继续进行实践，我们可以预期，将会有更多，更高的敏感性，特异性，诊断的新方法较短。 参考文献

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