癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备[发明专利]

[12]发明专利申请公布说明书

[21]申请号200710107293.3

[51]Int.CI.

G01N 33/53 (2006.01)G01N 33/577 (2006.01)G01N 33/574 (2006.01)C07K 7/08 (2006.01)

[43]公开日2008年12月3日[22]申请日2007.05.28[21]申请号200710107293.3

[71]申请人丁恩雨

地址200433上海市政肃路45弄9号402室共同申请人丁荣新 桑恩典[72]发明人丁恩雨 丁荣新 桑恩典

[11]公开号CN 101315367A

权利要求书 1 页 说明书 4 页

[54]发明名称

癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备[57]摘要

一种癌抗原125(CA125)酶联免疫吸附检测试剂盒，能够直接从人血清中快速地检测出CA125的浓度。其主要技术特征是选择CA125外显子1中的特定氨基酸序列制备单克隆抗体；选择CA125外显子3中的特定氨基酸序列制备兔抗CA125多克隆抗体。检测时，样品可同时与固相单抗以及酶标兔抗CA125多克隆抗体相结合。血清中CA125水平升高多见于卵巢癌，亦见于子宫内膜炎及其它癌症。该检测试剂盒可用于卵巢癌等检测以及治疗预后好坏的判定。

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权 利 要 求 书

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1.一种应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)的癌抗原125(CA125)检测试剂盒，其主要技术特征系采用完整CA125分子中的抗原决定簇所制备的单克隆抗体来包被反应板的微孔，用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)标记的兔抗CA125多克隆抗体作为抗体-酶结合溶液。被检样品能够同时与上述两种抗体起反应。

用以制备该检测试剂盒中所用CA125单克隆抗体的抗原决定簇，系CA125分子外显子(exon)1中的特定多肽。其氨基酸序列(序列1)为Asp Met Arg His Pro Gly Ser Arg Lys Phe AsnAla Thr Glu Arg。

2.用以制备该检测试剂盒中所用兔抗CA125多克隆抗体的抗原决定簇，系CA125分子外显子(exon)3中的特定多肽。其氨基酸序列(序列2)为Thr His Arg Pro Asp Pro Glu Asp LeuGly Leu Asp Arg Glu Leu Tyr。

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说 明 书

癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备

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所属技术领域

本发明专利涉及一种能够定量测定人血清或血浆中癌抗原125(CA125)浓度的酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒的制备。背景技术

卵巢癌是妇女癌变中第八个常见的病种。目前，仍没有标准的筛选方法来检测卵巢癌

2]

[1，

。血清中CA125是一种高分子量的糖蛋白

[3]

，是一种与表皮卵巢癌相关的表面抗原。研究

表明，血清CA125水平的升高见于严重的子宫内膜炎和卵巢癌。60％以上患有卵巢癌的妇女，其血清CA125的浓度高于35单位/毫升。血清CA125浓度的变化亦可用于术后监测与预后好坏的判定。迄今为止，CA125是残留性(residual)表皮卵巢癌的非常敏感的标记物(marker)。此外，CA125浓度的升高亦见于肺癌、宫颈癌、输卵管癌、子宫癌以及子宫内膜炎等。 目前，国外有采用ELISA来检测人血清中CA125浓度的技术手段。一般采用双抗体夹芯法，即样品同时与固相抗体以及酶联抗体结合。由于这些产品受到知识产权的限制，我们不能自行生产。另外，这些产品的特异性与敏感性有待进一步提高发明内容

为了生产我们拥有自主知识产权的产品，本发明提供一种新的CA125 ELISA检测试剂盒。该检测试剂盒能够直接从人血清或血浆中快速地检测出CA125的浓度，故能广泛应用于临床快速诊断。

该发明专利的主要技术特征是采用先进的生物科学技术、大量的计算分析和反复的科学试验等手段从CA125外显子1中选择特定的氨基酸序列(序列I：Asp Met Arg His Pro Gly SerArg Lys Phe Asn Ala Thr Glu Arg)，合成多肽作为抗原，制备CA125单克隆抗体；从CA125外显子3中选择特定的氨基酸序列(序列II：Thr His Arg Pro Asp Pro Glu Asp Leu Gly Leu AspArg Glu Leu Tyr)，合成多肽作为抗原，制备兔抗CA125多克隆抗体。 具体实施方式

首先，按照上述氨基酸序列1合成多肽，与载体蛋白(如KLH)结合，制备CA125单克隆抗体，将其包被于反应板的微孔内，制成固相抗体。

其次，按照上述氨基酸序列2合成多肽，与载体蛋白(如KLH)结合，并与抗原佐剂混合，通过免疫兔子制备兔抗CA125多克隆抗体，再与辣根过氧化物酶(HRP)结合制得酶标抗体。检测时，样品可同时与固相CA125单克隆抗体以及酶标兔抗CA125多克隆抗体结合，其余则按常规方法进行。底物加入后，显色程度与样品中CA125浓度成正相关。与标准CA125浓度相对照，即可知样品中CA125的浓度。健康妇女的CA125正常值低于35单位/毫升。 该检测试剂盒应置于2-8℃冰箱中保存，使用时应用450nm波长的光波测定其吸光度来进行检测。

3

[4]

。

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参考文献：

1.Yurkovetsky ZR，Linkov FY，E Malehorn D，Lokshin AE.Multiple biomarker panels for

early detection of ovarian cancer.Future Oncol.2006 Dec；2(6)：733-741. 2.Munkarah A，Chatterjee M，Tainsky MA.Update on ovarian cancer screening.Curr Opin

Obstet Gynecol.2007 Feb；19(1)：22-26.

3.Bast RC Jr，Badgwell D，Lu Z，etc.New tumor markers：Ca125 and beyond.Int J Gynecol

Cancer 2005 Nov-Dec；15 suppl 3：274-281.

4.Chatterjee SK，Zetter BR.Cancer biomarkers：knowing the present and predicting the

future.Future Oncology.2005.1(1)：37-50.

4

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氨基酸序列表 序列I

<110>丁恩雨，丁荣新，桑恩典

<120>癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备 <160>1 <210>1 <211>15 <212>PRT

<213>从CA125外显子1中选择的特定序列 <220> <400>1

Asp Met Arg His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Ala Thr Glu Arg 1               5                   10                  15 序列II

<110>丁恩雨，丁荣新，桑恩典

<120>癌抗原125酶联免疫吸附检测试剂盒的制备 <160>1 <210>1 <211>16 <212>PRT

5

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<213>从CA125外显子3中选择的特定序列 <220> <400>1

Thr His Arg Pro Asp Pro Glu Asp Leu Gly Leu Asp Arg Glu Leu Tyr 1               5                   10                  15

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