联合基因检测在进展期结直肠癌术后化疗中的应用

高登鹏;贾秀艳;刘振勇;张霄程;刘英;陈雷 【期刊名称】《标记免疫分析与临床》 【年(卷),期】2016(023)007 【总页数】3页(P842-844)

【关键词】结直肠癌;进展期;联合基因检测;无进展生存率;总生存率 【作 者】高登鹏;贾秀艳;刘振勇;张霄程;刘英;陈雷

【作者单位】廊坊市人民医院普通外科,河北廊坊065000;廊坊市卫生职业学院医技系,河北廊坊065000;永清县医院外一科,河北廊坊065000;廊坊市人民医院普通外科,河北廊坊065000;廊坊市人民医院普通外科,河北廊坊065000;廊坊市人民医院普通外科,河北廊坊065000 【正文语种】中 文

近年来，随着生活水平的提高和饮食结构的改变，结直肠癌的发病率和死亡率逐年增加。结直肠癌治疗上首选根治性手术切除，但单纯手术治疗5年生存率小于50%，近一半患者术后出现复发或转移。为降低复发和转移风险，绝大多数患者术后需要接受化疗。根据病理分期，NCCN指南对结直肠癌化疗方案有详细解读，FOLFOX方案为首选辅助化疗，但因个体差异部分患者最终导致化疗失败。长期以来，临床医生不断探索最佳治疗方案，靶向药物被相继批准应用于临床，取得较好效果，但基层医院绝大多数患者在经济上不能承受，化疗方案的选择仍至关重要。通过基因检测指导肿瘤患者术后化疗已成为大趋势。目前肿瘤药物治疗的研究热点

就是根据不同个体的药物敏感及耐药相关基因表达的情况来选择更有效的化疗方案。其中已有研究表明，结直肠肿瘤组织中ERCC1、BRCA1、RAP80的高表达与铂类耐药密切相关，ERCCl、BRCA1、RAP80高表达患者应用含铂方案治疗效果并不明显；TYMS的过量表达与氟类药物的抗药性相关，氟类药物对TYMS表达低的患者疗效好。EGFR高表达患者更受益于含伊立替康的化疗方案。基于上述研究的基础，我们通过检测Ⅱ、Ⅲ期结直肠癌患者肿瘤组织中TYMS、ERCC1、BRCA1、RAP80、EGFR多种基因表达情况，选用敏感的化疗方案，增加化疗有效性，提高患者生存率，改善预后，具体报道如下。 1 研究对象

选取2010年4月至2012年10月结直肠癌根治术后病理组织学诊断均为Ⅱ、Ⅲ期的患者60例，随机分为2组。实验组30例，男性17例，女性13例，年龄32～81岁，中位年龄55岁，结肠癌16例，直肠癌14例，Ⅱ期患者17例、Ⅲ期患者13例，高分化腺癌5例，中分化腺癌14例，低分化腺癌11例；对照组30例，男性16例，女性14例，年龄36～79岁，中位年龄54岁，结肠癌17例，直肠癌13例，Ⅱ期患者18例、Ⅲ期患者12例，高分化腺癌6例，中分化腺癌13例，低分化腺癌11例。两组患者性别、年龄、肿瘤部位、临床分期、病理类型比较，差别均无统计学意义（P＞0.05）。两组资料具有可比性。 2 治疗方法

所有患者术前均未给予新辅助放化疗，实验组进行肿瘤组织TYMS、ERCC1、BRCA1、EGFR、RAP80等基因表达检测，依据检测结果选用化疗方案：ERCC1、BRCA1、RAP80低表达、TYMS低表达患者选用FOLFOX4方案，共 15例；ERCC1、BRCA1、RAP80低表达、TYMS高表达患者选用FOLFOX6方案，共4例；EGFR高表达患者选用FOLFIRI方案，共11例。对照组不进行肿瘤组织的基因检测，应用FOLFOX4方案27例，失效后选用FOLFOX6患者1例，选用

FOLFIRI方案2例。2组患者均于术后2～4周行辅助化疗，疗程为6～8周期。每2周期后复查，共随访3年，计算两组患者3年无进展生存率（PFS）、总生存率（OS）。 3 基因表达的检测

将患者术中切除的肿瘤组织石蜡样本送至北京雅康博生物科技有限公司检测中心进行检测，以Arms方法检测TYMS、ERCC1、BRCA1、RAP80、EGFR基因mRNA表达。 4 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

实验组3年无进展生存率（PFS）为66.7%，与对照组（60.0%）相比，差别有统计学意义（P＜0.05）；实验组3年总生存率（OS）为83.3%，与对照组（73.3%）相比，差别有统计学意义（P＜0.05）。此结果表明，对进展期结直肠癌肿瘤组织中TYMS、ERCC1、BRCA1、RAP80、EGFR等多个相关基因联合检测，有助于选择更优化疗方案，提高化疗效果，明显增加结直肠癌患者的3年无进展生存率和总生存率。结果见表1。

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率在我国呈逐年上升趋势，每年有近10万患者死于结直肠癌，虽然手术治疗取得了很大进展，但术后局部复发和远处转移仍是结直肠癌治疗失败的主要原因。化疗是预防复发和转移的主要治疗手段。但因个体对化疗药物不敏感或耐药，导致化疗有效率仅约45%。如何选用敏感化疗药物制定个体化方案，减少或延缓复发和转移，延长患者生存期，是肿瘤科临床医生有待解决的重要问题。近年来，随着基因检测技术的进步，国内外一些研究已证实，相关基因表达情况可以反映不同个体对不同化疗药物的敏感性及耐药性，从而可以指导临床选择更有效的化疗方案。结直肠癌常见化疗药物有氟类、铂类、伊立替康

等，相关基因检测包括TYMS、ERCC1、BRCA1、RAP80、EGFR等。 核苷酸切除修复交错互补基因1（excision repair cross-complementing 1，ERCC1）是定位于人类染色体19q13.2-q13.3上的一段修复基因，在核苷酸切除修复系统（nucleotide excision repair，NER）中发挥关键作用。铂类药物通过药物结合到DNA上形成DNA加合物，这些加合物在DNA链之间形成共价交联来抑制DNA复制，从而引起细胞损伤。而这种在肿瘤细胞中由化疗药物引起的DNA损伤主要由NER途径修复。因此当ERCC1过表达时可迅速修复损伤的DNA而产生耐药，其表达可作为预测铂类化疗敏感性的指标。多个临床研究已证实结直肠癌中ERCC1低表达者对铂类更敏感，化疗效果更佳［1］。在我们的研究中，对ERCC1高表达的患者应用FOLFIRI方案，低表达者应用FOLFOX方案。 乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1）也是 NER途径中的关键基因，能参与由顺铂的多种原因引起的DNA双链损伤的修复，因此会引起被药物损伤的癌细胞DNA迅速修复，从而导致肿瘤细胞对顺铂耐药。临床研究表明，BRCA1的高表达会导致顺铂等铂类药物药效较差［2-3］。在我们的研究中，对BRCA 1高表达的患者应用FOLFIRI方案，低表达者应用FOLFOX方案。

受体相关蛋白80（receptorassociated protein 80，RAP80）是一种受体相关蛋白基因，是在BRCA1发挥作用时的一个伴侣蛋白，是BRCA1复合物进行DNA修复过程中的重要结构单元。RAP80蛋白结合到BRCA1蛋白识别的DNA损伤的必需区域，从而使 BRCA1能到达DNA损伤位点，通过泛素化途径在DNA损伤修复过程中发挥重要作用。有研究表明［4-5］，铂类药物对RAP80表达量相对较低的患者有更好的疗效，而RAP80高表达的患者则对铂类药物有较强的耐药性。在我们的研究中对RAP80高表达的患者应用FOLFIRI方案，低表达者应用FOLFOX方案。

氟类药物是使用范围非常广泛的化疗药物。氟类药物在细胞内能转变为5-氟尿嘧啶（5-FU），并进一步代谢为5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸（5F-dUMP），抑制脱氧胸苷酸合成酶的活性，因而能够影响到 DNA的合成；此外，氟类药物也能干扰蛋白质的合成，起到抑制癌症的效果。胸苷酸合成酶基因（TYMS）编码的胸苷酸合成酶（TS）是肿瘤生长的重要因子，氟类药物的代谢物5F-dUMP与TS结合，会抑制 TS的正常功能，影响DNA合成。研究表明，TYMS的过量表达与氟类药物的抗药性相关：氟类药物对TYMS表达低的患者疗效好［6］。在我们的研究中对TYMS高表达的患者应用FOLFOX6方案，低表达者应用FOLFOX4方案。 表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是原癌基因cerb-1的表达产物，它是一种具有配体依赖性酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白。EGFR的主要配体有表皮生长因子、双调蛋白、转化生长因子-α等。EGFR与配体结合形成二聚体，通过自动磷酸化过程实现多种细胞的增殖分化。它存在于除造血干细胞以外的大多数细胞中，其过度被激活可促进肿瘤细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管生成。EGFR在结直肠癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和胰腺癌等多种恶性肿瘤中呈过度表达。EGFR的表达水平能预测伊立替康的化疗敏感性。Vallböhmer等［7］研究证明，EGFR高表达患者对伊立替康为主的化疗方案更敏感。在我们的研究中，对EGFR高表达的患者应用FOLFIRI方案，低表达者应用FOLFOX方案。

本研究通过检测进展期结直肠癌肿瘤组织中TYMS、ERCC1、BRCA1、RAP80、EGFR等多个基因的表达情况，根据其表达水平选择较敏感的化疗方案。结果表明，与没有进行基因检测的对照组相比，观察组患者3年无进展生存率和总生存率均有所提高，差异有统计学意义。这证明进行多个相关基因的联合检测能为进展期结直肠癌患者术后选用更敏感的化疗方案提供依据，可增加化疗有效率，减少耐药，提高患者生活质量，延长生存期。我们将对这些病例进行更长时间的随访，扩大样

本量，进行更多基因的联合检测，以得到更有说服力的数据指导临床肿瘤药物治疗。

【相关文献】

［1］Stoehlmacher J，Park D J，Zhang W，et al.A multivariate analysis of genomic polymorphisms：prediction of clinical outcome to 5-Fu/ oxaliplatin combination chemotherapy in refractory colorectal cancer. Br JCancer，2004，91（2）：344-354. ［2］Tassone P，Di Martino M T，Ventura M，et al.Loss of BRCA1 function increases the antitumor activity of cisplatin against human breast cancer xenografts in vivo.Cancer Biol Ther，2009，8（7）：648-653.

［3］尚晓滨，于振涛，唐鹏，等.DNA修复相关蛋白与肺癌顺铂耐药的关系.山东医药，2009，49（24）：25-27.

［4］Sobhian B，Shao G，Lilli D R，et al.RAP80 Targets BRCA1 to specific ubiquitin structures at DNA damage sites.Science，2007，316（5828）：1198-1202.

［5］张文君，魏嘉.BRCA1基因和RAP80 mRNA表达水平与胃癌铂类化疗预后的相关性研究.中国肿瘤临床与康复，2012，19（2）：122-125.

［6］Marsh S.Thymidylate synthase pharmacogenetics.Invest New Drugs，2005，12（6）：533-537.

［7］Vallböhmer D，Iqbal S，Yang D Y，et al.Molecular determinants of irinotecan efficacy.Int JCancer，2006，119（10）：2435-2442.