L-异亮氨酸补料分批发酵的研究

第２８卷第４期　天津师范大学学报（自然科学版）　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）　ＶｏＩ．２８　Ｎｏ．４　０ｃｔ．２００８　２００８年１０月　文章编号：１６７１—１１１４（２００８）０４—０００６—０３　Ｌ－异亮氨酸补料分批发酵的研究　宋文军　（天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津３００１３４）　摘要：研究了不同初糖浓度、葡萄糖及氮的补加方式在Ｌ一异亮氨酸发酵过程中对其产酸率、转化率等参数的影　响，确定了Ｌ一异亮氨酸补料分批发酵的最佳条件，在最佳补料分批发酵条件下，Ｌ一异亮氨酸产量达２１．９６　ｇ／Ｌ，糖　酸转化率达１５．３４％．　关键词：Ｌ一异亮氨酸；补料分批发酵；条件优化　中图分类号：Ｑ５１７；ＴＱ９２２　文献标识码：Ａ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｆｅｄ＿＿ｂａｔｃｈ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌ・－ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ＳＯＮＧ　Ｗｅｎｊ　（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１３４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　ｑｕｏｍｏｄｏ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｏｎ　ｓｏｍｅ　ｐａ—　ｒａｍｅｔｅｒｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　Ｌ－ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｌ－ｉｓｏｌｅｕｅｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆｅ＆ｂａｔｃｈ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｌ－ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｆｉｍｅｄ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｏｐｔｉｒｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　Ｌ－ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ａｔｔａｉｎｅｄ　ｔｏ　２１．９６　ｇ／Ｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｗａｓ　１５．３４　．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌ—ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ；ｆｅｄ—ｂａｔｃｈ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　Ｌ一异亮氨酸是人体８种必需氨基酸之一，又是３　种支链氨基酸之一，因其特殊的结构和功能，在人类　生命代谢中具有特别重要的地位．Ｌ一异亮氨酸除用　于一般营养型复合氨基酸输液、要素膳外，还作为特　殊的支链氨基酸之一被大量用于配制治疗型特种氨　基酸输液如肝安、肾安氨基酸输液，特别是以Ｌ＿异亮　ＡＥＣ　），本实验室保藏菌种．　１．２培养基　１）种子培养基：蔗糖３Ｏ　ｇ，尿素２　ｇ，ＣＨ３ＣＯＯＮ￣　３．７　ｇ，ＫＨ２ＰＯ４・３Ｈ２Ｏ　３　ｇ，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．４　ｇ，　ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．０１　ｇ，ＭｎＳＯ４・Ｈ２　Ｏ　０．０１　ｇ，豆饼　水解液１６　ｇ，ＶＨ　２　ｍｇ，ＶＢ１　１　ｍｇ，ｐＨ一７．Ｏ～７．２，　０．０７５　ＭＰａ　１５　ｒａｉｎ．　氨酸为主要原料生产的高支链氨基酸输液、肝安糖　浆、肝醒灵口服液，对治疗各种肝脏疾病具有显著疗　效，因此，其用量逐年增长Ｌ１ｑ］．据文献报道＿４　］，在发　酵中采用较高浓度的葡萄糖进行分批发酵的转化率　很低，其主要原因是分批发酵方式使高浓度的初糖　２）发酵培养基：葡萄糖１５０　ｇ，（ＮＨ　）　ＳＧ　１０　ｇ，　ＫＨ２Ｐ０４・３Ｈ２Ｏ　１．５　ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ　３　ｇ，ＭｇＳＯ４　・７Ｈ２Ｏ　０．５　ｇ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．０１５　ｇ，ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ　０．０１５　ｇ，ＶＨ　１３０／ｉｇ，ＶＢ１　１　ｍｇ，Ｍｅｔ　２Ｏ　ｍｇ，豆饼水　抑制了菌体的产酸能力，而致糖酸转化率下降　．　本研究通过补料分批培养方式较好地解决了这一问　题，具体以黄色短杆菌ＳＷ０３７０作为实验菌株，对Ｌ一　异亮氨酸补料分批发酵条件进行了研究．　解液２０　ｇ，ｐＨ一７．２～７．５，ＣａＣＯ３　３０　ｇ（分消），　０．０７５　ＭＰａ　１０　ｍｉｎ，其中补料成分及补料量随实验　要求添加．　１．３实验方法　１材料与方法　１．１菌种　黄色短杆菌ＳＷ０３７０（Ｍｅｔ一＋Ｌｅｕ一＋ａ—ＡＢ　＋　１）种子培养：接一环生长良好的斜面种子至装　有３０　ｍＬ种子培养基的２５０　ｍＬ摇瓶中，８层纱布　封１：３，固定于旋转式摇床上（２００　ｒ／ｍｉｎ），３１℃振荡　培养至对数生长中后期．　收稿日期：２００７—１０—１０　作　者：宋文军（１９６７一），男，副教授，博士，主要从事生物工程方面的研究　第２８卷第４期　宋文军：Ｌ一异亮氨酸补料分批发酵的研究　・　７　’　２）摇瓶补料发酵：按１０　９／６接种量将种子液３　ｍＬ　接人装有２７　ｍＬ发酵培养基的５００　ｍＬ三角瓶中，８　层纱布封口，置旋转式摇床（２２０　ｒ／ｒａｉｎ）上，３ｌ℃下　振荡培养９６　ｈ．发酵过程补料量为８　ｍＬ，总装液量　由图１—３及表１可见，采用较低的初糖浓度，菌　体浓度增长快，可促进菌体生长．但随着葡萄糖浓度　的增加，在发酵中后期细胞生长速度与葡萄糖消耗速　度明显下降，糖酸转化率也相应降低．因此，单纯用　为３８　ｍＬ，补料次数、补料时间、每次补料体积随试　提高初糖浓度的措施并不能有效地增加糖酸转化率．　验要求操作．每种条件做３瓶，Ｌ一异亮氨酸产量取　平均值．　１．４分析方法　菌体生长测定为离心菌体后于１０５℃烘干至恒　重；ｐＨ用ｐＨ：６．４～８．０精密ｐＨ试纸测定；残糖　用ＳＢＡ一４０Ａ型葡萄糖一谷氨酸分析仪测定；氨基酸　用化学比色法测定．　２结果与讨论　２．１　不同初糖浓度与上厂异亮氨酸积累的关系　在发酵培养基中加入不同起始浓度的葡萄糖　（８０，１３０，１９０　ｇ／Ｌ）进行分批发酵，发酵过程中取样　测定菌体干重、残糖和Ｌ一异亮氨酸产量，结果如图　１—３所示．　ｔ／ｈ　图１不同初糖浓度葡萄糖的消耗量　ｔ／ｈ　图２不同初糖浓度菌体生长曲线　０　１６　２４　４Ｏ　５６　６４　７２　７８　９Ｏ　９６　ｔ／ｈ　图３不同初糖浓度Ｉ，异亮氨酸产量曲线　表１不同初糖浓度对发酵的影响　Ｐ初糖浓度／ＩＤｒ，异亮氨酸／ＩＤ苗体浓度／　发酵周　糖酸转　（ｇ・Ｌ一　）（ｇ・Ｌ一　）（ｇ・Ｌ一　）　期／ｈ　化率／　８０　９．５Ｏ　１５．４７　４Ｏ　１１．８８　１３Ｏ　１４．１０　１６．７Ｏ　７２　１Ｏ．８５　１９Ｏ　１９。６６　１７．２Ｏ　９６　１Ｏ．８Ｏ　２．２不同补糖方式对发酵的影响　试验中保持葡萄糖浓度（１５０　ｇ／Ｌ）和初糖浓度　（８０　ｇ／Ｌ）不变，考查了补糖次数、不同补糖时间对　Ｌ一异亮氨酸发酵的影响．接种后每瓶装液量为　３０　ｍＬ，含糖２．４　ｇ；每瓶补糖（浓度为４１２　ｇ／Ｌ）量　为：方式Ａ和方式Ｂ分别于发酵２４和３２　ｈ后，一　次性补加剩余的糖各８　ｍＬ（含３．３　ｇ）；方式Ｃ于发　酵２４和３２　ｈ后各补糖４　ｍＬ；方式Ｄ于发酵３２，４８，　６Ｏ和８０　ｈ后，每次补糖２　ｍＬ，实验结果见表２．　表２不同补糖方式的补料分批发酵结果　从表２可知，以补糖方式Ｄ即发酵过程第３２，　４８，６０和８０　ｈ分４次补糖的发酵效果比其他３种补　糖方式好．因为菌体在较低浓度葡萄糖下生长，不　存在底物葡萄糖对菌体生长和产酸的抑制作用．发　酵２４　ｈ，菌体处于对数生长初期，残糖为３９　ｇ／Ｌ左　右．方式Ａ补糖后葡萄糖浓度为１１７．６　ｇ／Ｌ，与分　批发酵相比，菌体仍在高浓度葡萄糖下生长，葡萄糖　对菌体生长和产酸的抑制作用没有明显减轻，因而　Ｌ一异亮氨酸产量提高不多．发酵３２　ｈ，菌体处于对　数生长中期，残糖为１８　ｇ／Ｌ左右，补糖后葡萄糖浓　度以方式Ｂ的最高，达１０１　ｇ／Ｌ，由于环境改变较　快，对菌体生长影响较大，因而产酸量相对较低．　２．３初铵浓度不同与发酵过程一次补铵对发酵的　影响　铵盐在Ｌ＿异亮氨酸发酵中具有非常重要的作用，　它不但可以补充培养基中的氮源，而且可以调节发酵　液的ｐＨ环境．因此，实验保持葡萄糖浓度（１５０　ｇ／Ｌ）　不变，考查了不同初铵浓度在发酵４８　ｈ后一次性补　加剩余（ＮＨ　）。ＳＯ　的发酵工艺对产酸的影响．每　瓶实际补铵体积见表３，补铵后每瓶总装液量仍为　・　８　・　天津师范大学学报（自然科学版）　２００８年１Ｏ月　３８　ｍＬ，实验结果见表４．　表３补铵体积说明表　补铵液浓度为４ｏ　ｇ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４溶液　表４初铵浓度不同的补料分批发酵结果　分析表４得知，以初铵浓度６　ｇ／Ｌ为佳．补铵之　前，初铵浓度偏低，发酵４８　ｈ补铵量相对最大，补铵　后与分批发酵的基质条件相差不大，仍属于在较高浓　度铵盐环境下发酵，因而产酸量提高不明显；补铵之　后，初铵浓度较大，发酵４８　ｈ的铵盐浓度仍较大，补　铵后菌体仍处于较高浓度铵盐环境下发酵，在未补酸　的情况下ｐＨ偏高，对菌体生长有一定的抑制作用，　致使产酸速率有所下降，因而产酸量亦相对较低．　２．４不同补铵方式对发酵的影响　实验考查了葡萄糖浓度（１５０　ｇ／Ｌ）、初铵浓度　（（ＮＨ　）。ＳＯ　为６　ｇ／Ｌ）相同而补铵次数、补铵时间　不同对Ｌ一异亮氨酸发酵的影响，实验结果见表５．　每瓶实际补铵时间和体积见表６．　表５不同补铵方式的补料分批发酵结果　补铵液浓度为５Ｏ　ｇ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４溶液，每瓶补铵体积均为８　ｍＬ，　总装液量仍为５０　ｍＬ．　分析表５可知，以补铵方式Ｈ即多次少量补铵、　维持较低铵盐浓度的发酵效果最好．　２．５全组分补料方式对发酵的影响　每瓶初始培养基２７　ｍＬ，含３Ｏ　ｍＬ体积的发酵培　养基全成分，其中初糖浓度为８０　ｇ／Ｌ，即２．４　ｇ／瓶，初　始（ＮＨ　）ｚＳＯ４浓度为６　ｇ／Ｌ，接种量３　ｍＬ，即初始装　液量为３Ｏ　ｍＬ，于发酵过程２４，４８，６Ｏ和８０　ｈ时，每　瓶每次补加２．５　ｍＬ全组分补料液，补料液含葡萄　糖３６０　ｇ／Ｌ和（ＮＨ　）２ＳＯ　２５　ｇ／Ｌ，补料完毕，每瓶　总装液量为４Ｏ　ｍＬ，实验结果见表７．　本实验是在初糖和初铵浓度均较低条件下，于　发酵过程２４　ｈ后分４次补加全组分培养基．每次补　料前残糖１５～２５　ｇ／Ｌ，补料后残糖８０　ｇ／Ｌ左右，　（ＮＨ　）　ＳＯ　浓度都低于６　ｇ／Ｌ，并且每次补加的都　是新鲜培养基，从而改善了基质环境，更有利于菌体　生长和代谢产酸．试验结果显示，上述补料分批发　酵工艺的Ｌ一异亮氨酸产量及糖酸转化率，分别比摇　瓶分批发酵提高了７．２９　９／６和６．９３　９／６．　表７全组分补料摇瓶发酵试验结果　３　结论　１）在其他发酵条件相同的情况下，采用不同初　糖浓度的分批发酵，其结果为采用较高的初糖浓度　会使发酵周期延长，糖酸转化率降低；而较低浓度的　初糖可以使菌体增长快，耗糖速度加快，但是产酸率　没有达到最高值．所以单纯用提高初糖浓度的方法　并不能有效地增加Ｌ一异亮氨酸的产率和转化率．　２）以摇瓶分批发酵优化条件为基础，进行了不同　补糖方式的摇瓶分批发酵研究，结果为初糖浓度在　８０　ｇ／Ｌ，于发酵过程第２４，３２，６Ｏ和８０　ｈ分４次补加　补料液，发酵９６　ｈ时，产Ｌ一异亮氨酸为２１．９６　ｇ／Ｌ，　比摇瓶分批发酵提高了７．２９％，糖酸转化率达到　１５．３４％．　参考文献：　［１］Ｓｈｉｉｏ　Ｉ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌ—ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ｂｙ　ＡＨＶ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｍｕｔａｎｔｓ　ｏｆ　ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆａｌｖｕｍ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９７３（３７）：　２０５３—２０５８．　［２］Ｉｋｅｄａ　Ｓ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　Ｌ—ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｅｒｓ　ａｍｏｎｇ　Ｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｍｕｔａｎｔｓ　ｏｆ　Ｌ—ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９７６（４０）：５１１—５１６．　［３］Ｉｄｅｄａ　Ｓ．Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌ—ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９７６（４０）：５１７—５２２．　［４］Ｇｕｉｌｌｏｕｅｔ　Ｓ，Ｒｏｄａｌ　Ａ　Ａ，Ａｎ　Ｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅｓｃｈｅ—　ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｃａｔａｂｏｌｉｃ　ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ　ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ　ｉｎ　Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｇｌｕ—　ｔａｍｉｃｕｍ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉ—　ｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９９，６５（７）：３１００—３１０７．　（下转第１８页）　天津师范大学学报（自然科学版）　２００８年１Ｏ月　在Ｂｒｏｃｋ幼苗中共检测到约３００个蛋白质斑　参考文献：　［１］　齐莉莉，陈佩度，刘大钧，等．小麦白粉病新抗原一基因　Ｐｍ２１ＥＪ］．作物学报，２００７，３（２１）：２５８—２６２．　Ｅ２３　Ｈｕ　Ｘ　Ｙ，Ｏｈｍ　Ｈ　Ｗ，Ｄｗｅｉｋａｔ　Ｉ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＡＰＤ　ｍａｒｋ—　ｅｒｓ　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ＰＭ１　ｆｏｒ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ　ｉｎ　点；分子量为８～１１０　ｋＤ，等电点在ｐＨ一４．５～８．６　时，Ｂｒｏｃｋ、京４１１和杂交及回交后代的双向电泳蛋　白质谱型基本一致．但在京４１１中，存在一个分子　量约为８　ｋＤ、等电点约为５．３的特异蛋白，此特异　蛋白在Ｂｒｏｃｋ中不存在；在京４１１与Ｂｒｏｃｋ杂交、回　交后所得后代近等基因系中，也没有检测到８　ｋＤ／　ｐＩ　５．３特异蛋白，而此近等基因系的双向电泳谱型　与抗病亲本Ｂｒｏｃｋ完全一致，在幼苗蛋白质谱型上　呈Ｂｒｏｃｋ显性遗传．　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒ　Ａｐｐｌ　Ｇｅｎｅｔ，１９９７，９４：８３２—８４０．　Ｅ３］张维佳，李纯正，黄海泉，等．玉米Ｔ型细胞质雄性不育系与　相应保持系线粒体蛋白质组中的差异蛋白ＥＪ］．分子细胞生物　学报，２００７，６（４Ｏ）：４１９—４２７．　［４］Ｍｉｇｕｅｌ　Ｃｕｒｔｏ，Ｅｍｉｌｉｏ　Ｃａｍａｆｅｉｔａ，Ｊｕａｎ　Ａ　Ｌｏｐｅｚ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｐｒｏ—　ｔｅｏｍｉｃ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｐｅａ（Ｐｉｓｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ）ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ　ｐｉｓｉ）［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００６，６：　３　结论　京４１１是严重感染白粉病的一个小麦品种，当　Ｓ１６３一Ｓ１７４．　［５］Ｂｒａｄｆｏｒｄ　Ｍ．Ａ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｇｒａｍ　ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ　ｏｆ　ｐｒｏ—　与抗病品种Ｂｒｏｃｋ杂交后，后代由感病转变为抗病，　双向电泳检测所得蛋白质组成结果与上述现象相一　ｔｅｉｎ—ｄｙｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ［Ｊ］．Ａｎｕａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９７６，７２：２４８—２５４．　Ｅ６］０　Ｆａｒｒｅｌ　Ｐ　Ｈ．Ｈｉｇｈ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏ—　致，在感病品种京４１１中存在的８　ｋＤ／ｐＩ　５．３特异　蛋白，却在与Ｂｒｏｃｋ杂交后的后代近等基因系中不　存在．幼苗蛋白质谱型与Ｂｒｏｃｋ相一致，近等基因　系中蛋白质谱型的遗传与抗性的遗传相一致，这虽　ｒｅｓｉｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９７５，２５０：４００７—４０２１．　［７］Ｌａｅｍｍｌｉ　Ｕ　Ｋ．Ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｓ—　ｓｅｍｂｌｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅａｄ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｓｅ　Ｔ４　ＥＪ］．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ），　１９７０，２２７：６８０—６８５．　．Ｅ８］Ｗａｒｙ　Ｗ，Ｂｏｕｌｉｋａｓ　Ｔ，Ｗａｒｙ　Ｖ　Ｐ，ｅｔ　ａｔ．Ｓｉｌｖｅｒ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　ｇｅｌｓ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８１，１１８：１９７—２０３．　然还不能肯定京４１１中存在的特异蛋白是否与其感　病特性相关，但此至少可以为今后小麦白粉病的抗　［９］Ｗａｎｇ　Ｚ　Ｙ，Ｚｈａｏ　Ｐ，Ｃｈｅｎ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒｓ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ＳＣＡＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ａ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ　ｒｅ—　ｓｉｓｔａｎｃｅ　ｇｅｎｅ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ　ｃｕｌｔｉｖａｒ　性鉴别提供一种参考依据．这在小麦白粉病抗、感　特性的实验室内检测及抗白粉病小麦新品种的选育　等方面可能是有意义的．　Ｂｒｏｃｋ［Ｊ￣．Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，８（５）：５７８—５８５．　（责任编校　南凤仙）　（上接第８页）　Ｅ５Ｊ　Ｇｕｉｌｌｏｕｅｔ　Ｓ，Ｒｏｄａｌ　Ａ　Ａ，Ａｎ　Ｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｆｌｏｗ　ｔｏｗａｒｄ　ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ　ｂｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ａ　ｃａｔａｂｏｌｉｃ　ｔｈｒｅ—　ｏｎｉｎｅ　ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ　ｉｎ　ａ　ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ—　ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ——　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｆｉｓｈ　ｓａｕｃｅ　Ｅ　Ｊ］．Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄｓ，２００３，２４（１—２）：８１—８７．　Ｅ８］张伟国．Ｌ一异亮氨酸的发酵条件［Ｊ］．无锡轻工大学学报，　１９９８，１７（３）：４６—４８．　“　ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００１，５７（５—　６）：６６７—６７３．　［９］　张伟国．供氧对Ｌ一异亮氨酸分批发酵的影响［Ｊ］．无锡轻工大　学学报，２００１，２０（５）：５３８—５３９．　Ｅ６］Ｅｄｅｎ　Ａ，Ｖａｎ　Ｎｅｄｅｒｖｅｌｄｅ　Ｌ，Ｄｒｕｋｋｅｒ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈｅｄ－ｃｈａｉｎ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　［１Ｏ３许正宏，陈小静．营养及环境条件对黄色短杆菌ＷＬ－１０发酵　生产Ｌ一异亮氨酸的影响［Ｊ］．食品与发酵工业，２００２，２８（５）：　１４—１７．　ｆｕｓｅｌ　ａｌｃｏｈｏｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｙｅａｓｔ　ＥＪ］．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００１，５５（３）：２９６—３００．　Ｅ７］　Ｓａｎｃｅｄａ　Ｎ　Ｇ，Ｓｕｚｕｋｉ　Ｅ，Ｋｕｒａｔａ　Ｔ．Ｂｒａｎｃｈｅｄ　ｃｈａｉｎ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｓ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂｒａｎｃｈｅｄ　ｃｈａｉｎ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ　［１１］　浦军平，陈刚．Ｌ一异亮氨酸发酵工艺条件的研究．食品与发　酵工业，２００３，２９（２）：９３—９６．　（责任编校　南风仙）