残渣中甘草多糖的提取分离

甘草酸的提取和测定

一．实验目的：1掌握干草的提取原理 2熟悉皂甙的性质和测定方法

二实验原理

甘草酸是由甘草中提取。甘草，又名美草、蜜甘、甜根子，多生长在我国西北、

华北、东北地区，为多年生草本植物。甘草酸作为其主要成分，随产地不同含量亦不同，一般在(4～14)％之内。甘草酸是甘草甜味的有效成分，又名甘草甜素、甘草皂甙。分子式42H62O16，相对分子质量822.92。 甘草酸为白色或淡黄色结晶型粉末，熔点220 ℃，有特殊甜味，其甜度约为蔗糖的250倍，溶于热水和热的稀乙醇，不溶于无水乙醇和乙醚。甘草酸遇酸则沉淀，常利用此性质进行提取和精制。为了使用方便，一般都把甘草酸制成水溶性的盐类，如甘草酸钠、甘草酸二钠、甘草酸三钠、甘草酸铵等。

方法：甘草酸在原料中以钾盐和钙盐的形式存在，其盐易溶于水，因此可用极性溶剂溶解，提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离的甘草酸。 三．实验步骤

甘草酸的制备

（1） 粉碎：将干净干燥的甘草放入粉碎机中粉碎，过10目筛选，制得甘草粉。

（2） 提取：称取一定质量的甘草粉放入反应器中，加入其5倍质量的水，在搅拌下于85 ℃以上加热回流2．5 h，过滤、滤渣再加3倍质量的水重复提取一次，合并泸液。

（3） 浓缩：将甘草酸提取液用薄膜蒸发器进行真空浓缩，当滤液体积减少4／5时，趁热过滤。

（4） 分离：在已经冷却的浓缩滤液中，加入其1／2容量的95%的乙醇，然后静止过夜，经过滤除去植物蛋白、多糖等沉淀物。

（5） 沉淀：在经上述处理的甘草酸浓缩液中，用浓硫酸调其PH值，使甘草酸沉淀析出，然后进行离心分离，得粗甘草酸。

（6） 重结晶：用(60～70) ℃的稀乙醇进行重结晶，减压过滤后得甘草酸湿品。

（7） 干燥：将湿甘草酸放入真空干燥箱内，调节真空度，在(70～80) ℃温度下加热(40～60) min，即得干甘草酸。

（8） 成品：将干燥的甘草酸粉碎，过筛，即得甘草酸成品。

甘草酸的定性和定量测定

1 甘草酸的定性鉴别

取样品4 mg，置白磁板上，加4%硫酸7滴，渐渐变成橙黄色至橙红色。 2 甘草酸纯度的测定

取样品6g，精确称定，加蒸馏水50 mL溶解后，移置100 mL容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10 h。吸取上清液250 mL置小烧杯中，加氨试液3滴。然后加热至稠膏状，加30 mL蒸馏水溶解，慢慢加入3%盐酸溶液5mL，在冰水中冷却30 min，过滤，沉淀物用5mL冰水洗3次。弃去洗液及滤液，将沉淀物放在表面皿中使水分自然蒸发，然后加入10 mL65 ℃的乙醇，使沉淀物溶解，过滤，将乙醇溶液放入干燥恒重的烧杯中加热蒸干，精确称定。则甘草酸纯度(X)的计算采用下式：A=13.17C—0.017 提取率=nCV/m×100％ n 提取液稀释倍数 c 提取液中甘草酸的浓度mg/ml v 提取液体积ml m 甘草的质量mg A 吸光度 甘草酸产品的质量指标

经测试甘草酸的质量指标如下(质量分数)：甘草酸含量(以C42H62O16计)：≥65％；水分：≤12％；灰分：≤11％；重金属：≤25×10－6；熔点：218－220 ℃。

残渣中甘草多糖的提取分离

一、 实验目的: 掌握多糖类物质的提取方法。 二、 实验原理：

甘草多糖为易溶于水的白色粉末，熔点很高，不溶于酒精等有机溶剂，故

可以用水提醇沉法得到甘草多糖。

醇沉法的基本原理是：利用药材等植物中的大多数成分如生物碱盐、甙类、有机 酸类、氨基酸、多糖等易溶于水和醇中的特性，用水提出，并将其提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶物质，最后得到澄明液体。

苯酚法测定；糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。

三、实验材料和仪器：

仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。试剂：提取甘草酸后的废渣，硫酸，苯酚，95%乙醇，葡萄糖标准品。药品配置方法 （1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。 （2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。（3）浓硫酸（比重1.84）。（4）1％蔗糖标

准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。（ 5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。

四、实验步骤：

1、取一定量的甘草药渣，将中药水提液浓缩至1︰1～1︰2（ml︰g），药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。操作时应注意以下问题：①药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度，若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50％～60％可除去淀粉等杂质，含醇量达75％以上大部分杂质均可沉淀除去。④慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。

2、将每次提取的滤液过滤并合并，量取体积，并测定吸光度，粗步计算甘草多糖得率。

3、提取液减压浓缩，浓缩液加95%乙醇使最后醇浓度到一定浓度，静置过夜。

4、沉淀干燥，得粗黄多糖。 5、鉴定：

1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按下表加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管

液正面以 5－20s。加入5 mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程

管号 100ug/L蔗糖液（ml） 0 0 1 0.2 2 0.4 3 0.6 4 0.8 5 1.0 6 1.2 7 1.4 8 1.6 9 1.8 10 2.0 水（ml) 2.0 1.8 蔗糖量0 （μg）

20 1.6 40 1.4 60 1.2 80 1.0 100 0.8 120 0.6 140 0.4 160 0.2 180 0 200 2、吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。

可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100 。