非小细胞肺癌微转移诊断进展

第２５卷　第６期　２０１０年１１月　内蒙古民族大学学报（自然科学版）　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ　Ｖｏ１．２５　Ｎｏ．６　ＮＯＶ．２０ｌ０　非小细胞肺癌微转移诊断进展　，　闰　丽　，付秀华　（１．内蒙古医学院，内蒙古呼和浩特０１００５９；２．内蒙古医学院附属医院呼吸内科，内蒙古呼和浩特０１００５０）　（摘要］非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）是最常见的恶性肿瘤＿｛艮多分期早，经过手术治疗的患者。术后仍出现转移　及复发．这表明患者在术前已存在着通过常规手段无法检测的微转移病灶．国内外学者就非小细胞肺癌微转　移的诊断做了大量研究，以期寻找到检测微转移的理想标志物及方法，更准确的分析，合理治疗，提高患者的　生存率，但目前尚无统一标准．　［关键词）非小细胞肺癌；微转移　［中图分类号）Ｒ７３４．２　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１６７１－０１８５（２０１０）０６—０７１０—０４　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　Ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　Ｃｅｌｌ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　ＹＡＮ　Ｌｉ　，ＦＵ　Ｘｉｕ—ｈｕａ　（１．ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＭｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｏｈｈｏｔ　０１００５９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍ（，ｎｇｏｌｉａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ＣｏＨｅｇｅ，Ｈｏｈｈｏｔ　０１００５０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｏｎ—ｓｉｎａｉｌ　Ｃｅｌｌ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＬＣ）ＷａＳ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｃｏｍｍｏｎ　ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．Ｍａｎｙ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＮＳＣＬＣ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ．ａｐｐｅａｒｅ（１　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｒｅｅｌｎＴｅｎｃｅ　ａｆｔｅｒ　ｓｕｒｇｍＴ．Ｔｈｉｓ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ．（１　ｔｈａｔ　Ｍｉｅｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｗｈｉｃｈ　ｕｎｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｂｙ　ＣＯＩＩＶｅＩ￣ｔｉｏｎａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ．ｗａｓ　ａｌｒｅａｄｙ　ｅｘｉｓｔｅ（１　１）ｅｆｏｒｅ　ｔｈｅ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．　Ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ａｎ（１　ｆｏｒｅｉｇｎ　ｓｃｈｏｌａｒｓ（１　ａ　ｌｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅｏｒｙ　ａｎ（１　ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｎｎ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ＮＳＣＬＣ　ｔｏ　ｉｎｄ　ｔｈｅ　ｍａｒｋｅｒｓ　ａｎ（ｆ１　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｄｏｔｅ（　ｌｉｅｔ１　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｏｒｅ　ｒａｔｉｏｎａｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．｝）ｕｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｕｎｉｆｏｒｍ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｔｏ　ａｄｄｒｅｓｓ　ｔｈｉｓ　ｐｒｏｈｌｅｍ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄ：Ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ　Ｃｅｌｌ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＬＣ）：Ｍｉｃｒ（ｍ１ｅｔａｓｔａｓｉｓ；　啼癌的发病率和死亡率逐年攀升，居恶性肿瘤首位，其中非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）占８（）％．即使在手术方法不断进步、放　化疗方案日趋成熟、基因生物技术蓬勃发展的今天、ＮＳＣＬＣ患者的５年生存率并没有得到明　的提高．Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ等“　报道早　期行根治性手术的ＮＳＣＬＣ患者，５年生存率为４０％一５０％，其复发率高达２５％一５５％．完全切除肿瘤的Ｉ期患者，术后复发率　仍高达２５％～５０％　．这表明在手术治疗前，患者已存在常规检查方法难以发现的微量转移　．日后形成远处转移病灶，造成　肿瘤复发，有相当多的文献资料描述和发现＿厂微转移的价值．　１　肺癌微转移的标志物　１　１　黏蛋白１（ＭＵＣＩ）ｍＲＮＡ　ＭＵＣＩ由　皮组织Ｇ细胞和某些黏膜下腺体分泌，共有６个成员（ＭＵＣ１、２、３、４、５ａ和５ｂ），编码上皮组织细胞膜上黏蛋　白的核心蛋白，是第一个用于非小细胞肺癌微转移检测的分子标记物．Ｓｈｕ—Ｈａｉ　Ｌｉ“　检测３０名肺癌患者淋巴结中　ＭＵＣｌｍＲＮＡ表达，指示微转移的敏感性为８６．７％．ｆ旦这种方法的问题在于良性组织中也有低水平的ＭＵＣ１存在，所以检测　的特异度低．　１．２细胞角蛋白（ＣＫｓ）ｍＲＮＡ　收稿日期：２０１０—０８—１６　作者简介：闫丽（１９８４一），女，内蒙古＝＃镇市人，在读硕士，研究方向为肺癌　通讯作者：付秀华，Ｅ—ｍａｉｌ：ＦｕｘｉｔＪｈｕａ５５５＠ｓ０ｈｕ．ｃｏｍ　第６期　闫丽等：非小细胞肺癌微转移诊断进展　７１１　检测非小细胞肺癌微转移最活跃的标志物是ＣＫｓ　ｍＲＮＡ，它是上皮细胞来源的真核细胞骨架中间丝蛋白的组成成分．　ＣＫｓ家族成员由ＣＫ１～ＣＫ２０组成，在ＮＳＣＬＣ微转移的研究中常以ＣＫ１９作为分子标记，被认为是具有代表意义的标志物．丁　凯等　应用ＲＴ—ＰＣＲ技术检测４８例ＮＳＣＬＣ患者，ｌ５例肺良性疾病患者和ｌ０例健康人外周血中ＣＫ１９　ｍＲＮＡ的表达，结果　ＮＳＣＬＣ患者外周血ＣＫ１９　ｍＲＮＡ阳性检出率为６８．１８％，明显高于肺良性疾病患者组和健康对照组，说明可以用　ＣＫ１９ｍＲＮＡ作为标志物来检测外周血中ＮＳＣＬＣ微转移．但肺良性疾病患者组中也发现有２例ＣＫ１９　ｍＲＮＡ的阳性表达，假　阳性率为１３．１３％，由此可见ＣＫ１９ｍＲＮＡ用于诊断ＮＳＣＬＣ微转移敏感度不高．　１．３肺特异性ｘ蛋白（ＬＵＮＸ）ｍＲＮＡ　日本学者１ｗａｏ等㈨发现了一种人类肺组织特异性基因，为肺癌的微转移诊断做出了突出贡献．它定位于２０ｐ１１．１－ｑ１２，　全长１０１５ｂｐ，其中有７６８个核苷酸的编码区域编码２５６个氨基酸，其分子量为２６．７ＫＤ．１ｗａｏ等用ＲＴ—ＰＣＲ检测ＮＳＣＬＣ患者手　术切除淋巴结中ＬＵＮＸｍＲＮＡ表达指示微转移，结果表明ＬＵＮＸ在正常肺组织及ＮＳＣＬＣ组织中高特异表达，而在正常组织　及其他人类肿瘤中低表达或不表达，该方法具有很高敏感性和特异性．　１．４外周血表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）ｍＲＮＡ　是一种分子量为１７０ｋｕ的细胞膜受体，被认为是原癌基因ＣｅｒｂＢ一１的表达产物．研究表明５０％～７０％肺癌患者中有　ＥＧＦＲ过度表达．宋萍等　用荧光定量ＰＣＲ技术检测ＮＳＣＬＣ患者外周血ＥＧＦＲｍＲＮＡ表达，阳性率４５．２％，而良性肺部病变患　者外周血ＥＧＦＲｍＲＮＡ无１例阳性表达．与ＣＫ１９相比具有较高的敏感性．　１．５癌基因和抑癌基因　癌基因或抑癌基因的缺失、突变及过量表达是特异的肿瘤标志物．如能在待检标本中检测到此类基因的突变、扩增和　过量表达，则有可能提示微转移存在．但这些基因只在一部分患者的原发肿瘤中表达，无异常表达者则无法以它们为标志　物检测微转移．ＫＳ１／４是上皮癌相关基因，Ｗａｌｌａｃｅ等　采用ＲＴ—ＰＣＲ检测ＮＳＣＬＣ患者淋巴结中ＬＵＮＸ、ＭＵＣｌ、ＫＳ１／４、ＣＥＡ，　ＣＫＩ９及ＰＳＥ的表达，结果ＫＳ１／４的阳性表达率为２５％，被认为是发现肿瘤微转移最特异的基因．　１．６癌胚抗原（ＣＥＡ）ｍＲＮＡ　１９６５年Ｇｏｌｄ等　发现一种抗原～ｃＥＡ，分子量约２００ＫＤ，存在于细胞膜上，当细胞癌变时，癌细胞失去极性，脱入到人体　液中，故测定体液中癌胚抗原含量，能辅助诊断恶性肿瘤．研究发现，外周血中表达ＣＥＡ　ｍＲＮＡ的非小细胞患者有较高的复　发率．但是在良性病变中血液ＣＥＡ含量也会升高，因此，影响了ＣＥＡ作为检测肺癌微转移的特异性，仅在联合检测中有参考　价值．　１．７肺表面活性蛋白Ｄ（ｓＰ—Ｄ）ｍＲＮＡ　目前公认非小细胞肺癌大多来源于支气管上皮的Ⅱ型细胞，能够合成分泌肺表面活性蛋白Ｄ（ＳＰ～Ｄ），而在正常的淋　巴结和血液中不表达，Ｂｅｔｚ等　应用ＲＴ—ＰＣＲ法检测肺癌患者淋巴结中的ＳＰ～ＤｍＲＮＡ表达，其中７３．９％的转移患者中阳性　表达，且对照组全部阴性．国内亦有学者对此进行相关研究，结论与文献相符，ＳＰ—ＤｍＲＮＡ是检测肺癌外周血微转移良好的　分子标志物”　．　１．８　结合素４３（ｃｏｎｎｅｘｉｎ　Ｃｘ）　结合素４３基因表达降低是启动子甲基化的结果，亦是肺癌发生中的一个参与机制．ｃｘ基因在肺癌组织中表达常降低．　Ｃｈｅｎ等“　采用ＲＴ—ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｎｒ　ｂｌｏｔ法分别检测ＮＳＣＬＣ患者癌组织和邻近正常肺组织中Ｃｘ　ｍＲＮＡ和蛋白表达，结果发　现区域淋巴结微转移的发生与肺癌邻近正常组织ＣｘｍＲＮＡ表达降低程度明显相关，而与肺癌组织ｃｘ表达程度无关，因而　认为测定ＮＳＣＬＣ邻近正常组织ＣｘｍＲＮＡ表达有可能作为淋巴结微转移的分子标记物．　１．９组织特异性蛋白质　如ＴＰＡ和ＥＰＡ，ＴＰＡ是一种可以反应肿瘤细胞增殖活性的单链多肽，结构与细胞角蛋白家族有同源性，在肺癌患者的　血清中显著增高，已被运用于肺癌等诊断及评价中”　．单独应用特异性为７５％，与ＣＥＡ联合检测特异性可达到１００％．ＥＰＡ家　族中的肿瘤相关抗原Ｌ６（ＴＡＬ６），在大多数的上皮细胞肿瘤中表达，Ｔｅｚｅｌ　Ｃ等使用免疫组化分析２１例早期肺癌患者切除　的淋巴结，发现有４例病人的淋巴结存在微转移，进一步提高ＴＮＭ分期的准确性“　．　１．１０黑色素瘤抗原基因（ＭＡＧＥ）　属于肿瘤特异性抗原中肿瘤睾丸抗原（ＣＴＡ）的一类，该基因家族在肺癌中有较高的表达，有望成为诊断ＮＳＣＬＣ微转移　的新标志物．通过ＲＴ—ＰＣＲ检测ＭＡＧＥ—Ａ在肺癌患者骨转移中的表达，阳性率可达５２％“　．　２肺癌微转移检测的常见方法　２．１流式细胞术（ＦＣＭ）　采用荧光标记的单克隆抗体与肿瘤细胞结合，通过流式细胞仪检测肿瘤细胞．牛中喜等　应用ＦＣＭ分析肺癌患者外　周血微转移，结果发现在正常人中亦有低阳性表达，这反映了抗体染色本身的缺点，亦不排除在取材时混入了上皮细胞．但　７１２　内蒙古民族大学学报　２０１０正　这些阳性表达只代表流式细胞术灵敏度的有限性，尚不能否定这一方法的科学性．　２．２蛋白印迹法（ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ）　是从受检组织的细胞溶解液中提取可溶性蛋白质，将电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，依次与肿瘤特异性单克　隆抗体发生抗原抗体反应并染色．敏感性和特异性均很高，能检测出纳克水平的微量肿瘤蛋白质．因蛋白质稳定，所以得出　的实验结果科学可靠．有报道称对肺癌微转移的检出率为４０％左右．　２．３基因芯片　将大量ＤＮＡ探针有序而高密度地排列于固相支持物表面，形成探针微阵列，然后与荧光或同位素标记的待测材料进行　杂交，应用扫描仪和相关软件对获得的信号进行分析，具有高通量、快速、平行化的优点．肿瘤转移是一个多基因参与的复杂　过程，基因芯片技术用于微转移诊断极具潜力　。　．这项技术经过发展和延伸，产生了组织芯片、蛋白芯片，可以广泛地与免　疫组织化学、原位杂交、原位ＲＴ—ＰＣＲ等技术结合，分别在基因、转录和表达产物的生物学功能水平上进行研究．　２．４免疫磁珠（ＩＭＢ）技术　是包被有单克降抗体的球型磁性微粒，可特异性地与靶物质结合使之具有磁响应性．是近年来国内外研究的一种新的　免疫学技术，被广泛地应用于医学卫生领域的许多方面．ＩＭＢ技术的优势在于可以保证被分离靶细胞的形态和功能的完　整，但在细胞检查中的存在假阳性及假阴性，进而影响到了其在临床中的应用开展．　２．５免疫组织化学技术（ＩＨＣ）　ＩＨＣ技术选用带有显色剂的特异性抗肿瘤细胞相关抗原的单克隆抗体，在组织细胞中通过抗原抗体反应，结合组织化　学呈色反应，对相应抗原进行检测，具有很高的敏感性，它可以发现１Ｏ　～ｌ０　个骨髓细胞中存在１个肿瘤细胞．Ｔｅｚｅｌ等“　采　用ＩＨＣ的方法对２ｌ例肺癌患者手术切除的局部淋巴结检测，结果重新划分了肿瘤分期．ＩＨＣ简单实用，但由于光镜下难以　区分造血前体细胞与骨髓微转移，以及低分化癌细胞缺乏抗原表达，上皮性抗原可出现在非上皮细胞中等，影响了该方法　的应用．　２　６逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）　是目前公认诊断３￣ｅＪ，细胞肺癌微转移最常用、最敏感的方法”　．原理是以ＲＮＡ为模版，反转录为ｃＤＮＡ后，进行ＰＣＲ扩　增，通过检测待检组织中的肿瘤标志物ｍＲＮＡ来证实肿瘤细胞的存在，其敏感性在１０一～１０～，但存在一定的假阳性．近年来发　展的荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ增加了定量的功能，弥补了这一缺陷，在一定程度上避免了假阳性的产生，使测量结果更加精确．但　ｍＲＮＡ的提取过程比较复杂，十分容易降解，检测过程中易受污染而影响实验的准确性．且无论是外周血中何种肿瘤微转移　标志物的表达对ＮＳＣＬＣ并不具有｛Ｆ常高的特异性造成了应用的局限性“　．　３肺癌微转移诊断的问题及展望　随着生命科学的迅速发展，必将非小细胞肺癌微转移的诊断推向更宽广的领域．目前非小细胞肺癌微转移的诊断，主　要集中在淋巴结、骨髓、外周血、胸膜腔中．许多学者认为，非小细胞肺癌微转移的诊断可以明确肿瘤分期、指导临床治疗和　判断预后．但也有学者认为，肺癌的病理类型多，分化程度大，微转移的诊断缺乏标准的检测方法及公认的分子标志物，存　在假阳性率．肿瘤的发展是一个多［大］素参与的过程，微转移的阳性检出率可提示有微转移的可能性极高，但并非一定形成　显性转移灶，且诊断微转移后如何治疗，尚存争议，其结论还需进一步的研究．筛选敏感性和特异性均较高的分子标志物将　是诊断－１Ｈ＇细胞肺癌微转移研究的一个方向．　参考文献　［１］Ｓｃａｇｌｉｏｎｉ　Ｇ，Ｎｏｖｅｌｌｏ　Ｓ　ＡｄｊＩ￣ｖａｎｔ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ　ＮＳＣＬＣ【Ｊ］．Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，　２００３．４２（Ｓｕｐｐ　ｌ１）：４７—５Ｉ．　［２］ＣｏｅｌｌｏＭＣ，Ｌｕｋｅｔｉｃｈ　ＪＤ，Ｌｉｔｌｃ　ＶＲ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｍｉｅｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｉｎ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　【Ｊ　Ｊ．Ｃｌｉｎ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，２００４，５（４）：２１４—２２５．　［３］Ｓａｉｎｔｉｇｎｙ　Ｐ，Ｃｏｕｈｍ　Ｓ，ＫａｍｂｏｕｃｈｎｅｒＭ，ｅｔ　ａｌ　ＲＴ—ＰＣＲ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＫ１９、ＣＫ７　ａｎｄＭＵＣ１　ｍＲＮＡ　ｆｏｒ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｅｓ　ｉｎ　ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊｊ．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２００５，ｌ１５（５）：７８１７—７８２１．　［４｝Ｓｈｕ—ｈａｌ　ｌｉ，Ｚｈｏｕ　Ｗａｎｇ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅ　Ｄｉａｇｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｌｙｍｐｈ　Ｎｏｄｅ　Ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ１）　Ｎｏｄｅ—ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ｝．ｗｏａｄ　Ｊ　ｓｕｒｇ，２００８，３２：１６５１—１６５６．　［５］丁凯，周华富，郭建极．检测非小细胞肺癌患者外周血ＣＫ１９　ｍＲＮＡ微转移的临床意义［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ，Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ，２０　１　０，４２—４４．　【６ｊ　１ｗａｏ　Ｋ．Ｗａｔａｎａｂｅ　Ｔ．Ｆｕｊｉｗａｒａ　Ｙ，ｅｌ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｕｍａｎ　ｈｍｇ－ｓｐｅｃｉｌｆｅ　ｇｅｎｅ，ＬＵＮＸ，ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　第６期　闫丽等：非小细胞肺癌微转移诊断进展　７１３　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｉｎ　ｎｏｎ　ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｌ＂［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９１（４）：　４３３－４３７．　［７］宋萍，李坚，郑金旭，等－夕　周血表皮生长因子受体和ＬＵＮＸ　ｍＲＮＡ表达对肺癌微转移诊断的价值［Ｊ］．南京医科大学　学报（自然科学版），２００８，２８（２）：１７３—１７６．　［８］Ｗａｌｌａｃｅ　ＭＢ，Ｂｌｏｃｋ　ＭＩ，Ｇｉｌｌａｎｄｅｍ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｃｕｒａｔｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｔｅｃ．ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ　ｉｎ　ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅｓ　ｓａｍｐｌｅｄ　ｂｙ　ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ　ｇｕｉｄｅｄ　ｎｅｅｄｌｅ　ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ【Ｊｊ．Ｃｈｅｓｔ，　２００５．１２７（２）：４３０—４３３．　［９］Ｇｏｌｄ　Ｐ，Ｆｒｅｅｄｍａｎ　ＳＯ．　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙ０ｎｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，　１９６５　（１２２）：４６７—４８１．　［１０］Ｂｅｔｚ　Ｃ，Ｐａｐａｄｏｐｏｕｆｏｓ　Ｔ，Ｂｕｃｈｗａｌｄ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｎｏｎ・・ｓｍａｌｌ——ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｒｅｙｅｌ＇ｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ　ｔａｓｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９９５，５５（１９）：４２８３—４２８６．　（１１］仲崇俊，蒋庚西，陶国华，等．非小细胞肺癌患者围手术期外用血中肺表面活性蛋白ＤｍＲＮＡ的表达及　１名床意义　［Ｊ］．中国肿瘤，２００７，１６（３）：１９６—１９８．　［１２］Ｃｈｅｎ　ＪＴ，Ｃｈｅｎｇ　Ｙｗ，Ｃｈｏｕ　ＭＣ，ｅｔ　ａ１．　ｒｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｂｅｒｒａｎｔ　ｃｏｎｎｅｘｉｎ　４３　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎｏｄａｌ　ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｉｎ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ【Ｊ］．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００３，９　（１１）：４２００—４２０４．　［１３］Ｂｕｃｃｈｅｒｉ　Ｇ．Ｔｕｍｏｒ　ｍａｒｋｅｒｓ：ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｍｅａｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｕｓｅ［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ　Ｉｎｃ，１９９９．４３５—４５２．　［１４］Ｔｅｚｅｌ　Ｃ，Ｅｒｓｅｖ　ＡＡ，Ｋｉｒｌａ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅｓ　ｉｎ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｔｈｏｒａｃ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅ　Ｓｕｒｇ，２００６　Ｍａｒ，５４（２）：１２４．　（１　５］Ｗｕｌｆ　Ｓｉｅｎｅ，ＩｎｇｏＭｅｃｋｌｅｎｂｕｒｇ，Ｓｅｂａｓｔｉａｎ　Ｄａｎｇｏ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＡＧＥ－Ａ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ　ｉｎ　ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗ　Ｉｓ　ａｎ　Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　Ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　Ｏｐｅｒａｂｌｅ　Ｎｏｎ－Ｓｍａｌｌ－Ｃｅｌｌ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００７，１３（１３）：　３８４０－３８４７．　［１６］牛中喜，郭金成，汪良骏，等．流式细胞术检测肺癌患者外周血微转移的探讨（Ｊ３．现代肿瘤医学，２００６，１４（８）：　９５０－９５１．　［１７］Ｋｕｌａｒａｔｎｅ　ＢＹ。Ｌｏｒｉｇａｎ　Ｐ，Ｂｒｏｗｎｅ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｔｕｍｏｕｒ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｔｉｌｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ（Ｊ）．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００２，５０：１６０—１６７．　［１８］刘建。任宏轩，伍治平．非小细胞肺癌外周血微转移的研究现状［Ｊ］．医学综述，２００９，１２（１５）：３５６５—３５６８．　【１９］Ｐｅｔｅｒ　Ｊ，Ｓｕｎａｎｄａ　Ｃ，Ｄａｒｃａｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ　ｔａｓｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔａｓｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅｓ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊｊ．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｎｌ，　１９９８．１６（１８）：２６３２—２６４０．　（责任编辑　赵贤芳）