铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠免疫功能影响的实验研究

・４９６・　中国中医药科技２０１５年９月第２２卷第５期Ｓｅｐ．２０１５　Ｖｏ１．２２　Ｎｏ．５　铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠　免疫功能影响的实验研究　戴世杰，何潆，李哲明，周小杰，李昌煜　（浙江中医药大学・杭州３１００５３）　摘要　目的：探讨铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法：实验以环磷酰胺致免疫抑　制小鼠为研究对象，分别按铁皮石斛龟苓膏低、中、高剂量灌胃给药，观察铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小　鼠血清溶血素水平、迟发型变态反应、血清ＩＬ一４和ＩＦＮ一　含量以及单核一巨噬细胞吞噬功能、外周白　细胞数和淋巴细胞数的影响。结果：与环磷酰胺组比较，铁皮石斛龟苓膏各剂量组均提高免疫抑制小鼠　血清溶血素水平（Ｐ＜０．０１）、ＩＬ一４和ＩＦＮ一＾ｙ含量（Ｐ＜０．０５）、外周白细胞数和淋巴细胞数（Ｐ＜０．０５）；　中、高剂量组均提高小鼠迟发型变态反应（Ｐ＜０．０５）；中剂量组增强小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能（Ｐ＜　０．０５）。结论：铁皮石斛龟苓膏具有提高免疫抑制小鼠免疫功能的作用。　关键词免疫抑制；铁皮石斛龟苓膏；免疫功能；小鼠　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｔｉｅｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｌｌｉｎｇ　Ｇａｏ（铁皮石斛龟苓膏）Ｏｉｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ　Ｍｉｃｅ　ＤＡＩ　Ｓｈ￣ｉｅ，ＨＥ　Ｙｉｎｇ，ＬＩ　Ｚｈｅｍｉｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｘｉａｏｊｉｅ，ＬＩ　Ｃｈａｎｇｙｕ　（Ｚｈｅｊｉａｎｇ　觇　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｈａｎｎｇｚｈｏｕ　３１００５３）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｔｉｅｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｉｌｉｎｇ　Ｇａｏ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐ－　ｐｒｅｓｓｉｖｅ　ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｍｏｄｅｌｓ．Ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｆｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｔｉｅｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｉｌｉｎｇ　Ｇａｏ　ａｔ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　０．７５，１．５，３（ｇ／ｋｇ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｔｉｃｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｉｌｉｎｇ　Ｇａｏ　ｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ，ｄｅｌａｙｅｄ　ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｅｒｕｍ　ＩＬ一４　ａｎｄ　ＩＦＮ一＾ｙ　ｌｅｖ・　ｅｌｓ，ｍｏｎｏｃｙｔｅ—ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，ｐｅｉｒｐｈｅｒａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏ－　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ　ｍｉｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌ０ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ，ｅａｃｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　Ｔｉｅｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｉｌｉｎｇ　Ｇａｏ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｓｅｒｕｍ　ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ　ｌｅｖｅｌ（Ｐ＜Ｏ．０１），ｒａｉｓｅ　ｓｅｒｕｍ　ＩＬ一４　ａｎｄ　ＩＦＮ一　ｌｅｖｅｌｓ（Ｐ＜０．０５），ｉｎ・　ｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ（Ｐ＜０．０５）；ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｈｉ【ｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｃｏｕｌｄ　ｅｎ・　ｈａｎｃｅ　ｄｅｌａｙｅｄ　ｔｙｐｅ　ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ（Ｐ＜０．０５）；ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｃｏｕｌｄ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ—ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｐｈａｇｏ—　ｃｙｔｏｓｉｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｉｅｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｉｌｉｎｇ　Ｇａｏ　ｃｏｕｌｄ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ　ｍｉｃｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ；Ｔｉｅｐｉ　Ｓｈｉｈｕ　Ｇｕｉｌｉｎｇ　Ｇａｏ；ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ；ｍｉｃｅ　铁皮石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ　ｏｆｌｉｃｉｎａｌｅ　Ｋｉｍｕｒａ　ｅｔ　Ｍｉｇｏ）系兰科　１材料　石斛属多年生草本植物，始载于《神农本草经》，具有益胃生　津、滋阴清热等功效　。现代研究表明，铁皮石斛具有提高　１．１　药物与试剂铁皮石斛：浙江中医药大学中药饮片有　限公司提供，批号：１４０７０１；龟苓膏粉：广西梧州双钱实业有　免疫功能、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等作用，临床应用日益广　泛　。龟苓膏是应用历史悠久的传统药膳，具有滋阴清　限公司，批号：１４０７２９；铁皮石斛龟苓膏的制备：称取１０　ｇ铁　皮石斛，粉碎后加入４ｏ倍水，在７０％的水浴中加热提取２　热、祛湿降火功效，现已成为药食两用的保健食品。以上二　者均有滋阴清热之功效，但二者合用对免疫功能的影响尚未　次，每次２小时，合并提取液，减压浓缩到一定体积的浸膏，　再加入７　ｇ龟苓膏粉搅拌混匀，制成铁皮石斛龟苓膏混悬　液；左旋咪唑（Ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ，ＬＭＳ）：浙江瑞新药业股份有限公　司，批号：２０１３０５０４。环磷酰胺（Ｃｙｃｌｏｐｈｓｐｈａｍｉｄｅ，Ｃｙ）：山西　普德药业股份有限公司，批号：４１０３０９０１；二硝基氟苯：杭州　禾德化工有限公司，批号：Ｕ３０５０；小鼠ＩＦＮ一　、ＩＬ一４　ＥＬＩＳＡ　试剂盒：上海信帆生物科技有限公司，批号：２０１４１０。　见报道。本文根据《保健食品检验与评价技术规范》（２００３　版）中有关提高免疫力功能学评价方法，观察铁皮石斛龟苓　膏对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，报告如下　。　基金项目：浙江省大学生科技创新活动项目（２０１３１２４１１００６０）　通讯作者：李昌煜，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｍ１５９＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ　１．２动物ＳＰＦ级健康成年ＩＣＲ小鼠，雄性，体质量（２０±　中国中医药科技２０１５年９月第２２卷第５期Ｓｅｐ．２０１５　Ｖｏ１．２２　Ｎｏ．５　・４９７・　２）ｇ，由上海西普尔一必凯实验动物有限公司提供，合格证　２．３铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠单核一巨噬细胞吞噬　号：ｓｃｘ￣（沪）２ｏ１３—００１６。饲养于浙江中医药大学动物实　功能的影响６０只小鼠分组、给药、造模同２．１。给药３Ｏ天　验研究中心，实验室饲养许可证号：ＳＹＸＫ（浙）２０１３—０１８４。　后，小鼠尾静脉注射稀释４倍的印度墨汁（０．１　ｍＬ／１０ｇ）。注　饲养条件：温度（２０±１）ｏｃ，湿度５０％一６０％。　入墨汁后２、１０分钟，分别从小鼠内眦静脉丛取血２０　，加　１．３仪器ＲＥ一３０００旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；　至２　ｍＬ０．１％ＮａｚＣＯ　溶液中，以Ｎａ２ＣＯ　溶液作空白对照，　Ｘｉｌ８００血液细胞分析仪：日本Ｓｙｓｍｅｘ公司；５４３０Ｒ高速冷冻　在６００　ａｍ波长处测光密度值（ＯＤ）。第二次取血后处死小　离心机：德国ｅｐｐｅｎｄｏｆ公司；ＰｏｗｅｒＷａｖｅ３４０酶标仪：美国Ｂｉｏ　鼠，分离肝脏和脾脏，用滤纸吸干并精确称量，计算吞噬速率　—ＴＥＫ。　（Ｋ）和吞噬指数（ａ）。统计处理同２．１。结果见表３。　２方法和结果　表３各组小鼠碳廓清水平的比较（　±ｓ，ｎ：ｌＯ）　２．１铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠血清溶血素水平的影　响小鼠按体质量随机分为６组，每组１Ｏ只，设铁皮石斛龟　苓膏低、中、高剂量组（０．７５、１．５、３　ｇ／ｋｇ），左旋咪唑对照组　（０．０２５　ｓ／ｋｇ），分别灌胃给予相应药物；正常对照组和环磷　酰胺模型对照组则给予等体积生理盐水。各组灌胃体积均　为０．３　ｍＬ／１０ｇ，１次／ｄ，连续３Ｏ天。给予受试物２４天后，除　正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组腹腔注射环磷酰　与正常组比较　Ｐ＜０．０５，　Ｐ＜０．０１；与模型组比较△Ｐ＜　胺（Ｏ．ｏ４　ｇ／ｋｇ），１次／ｄ，连续两天，建立免疫抑制小鼠模型。　０．０５．△ＡＰ＜０．０１　给药２５天后，每只小鼠腹腔注射２％（ｖ／ｖ）压积绵羊红细胞　２．４铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠外周白细胞、淋巴细　（ＳＲＢＣ）Ｏ．２　ｍＬ进行免疫。５天后，取血清测溶血反应，结果　胞和血清ＩＬ一４、ＩＦＮ一．ｙ含量的影响　用半数溶血值（ＨＣ５０）表示。数据分析采用ＳＰＳＳ１７．０统计　６０只小鼠分组、给药及造模同２．１。给药３０天，小鼠摘　软件，统计数据以“均数±标准差（　±ｓ）”表示；组间差异采　眼球取血，制备血浆和血清（３０００　ｒ／ｍｉｎ，１５　ｍｉｎ）。采用血细　用单因素方差分析。结果见表１。　胞分析仪检测小鼠外周白细胞数、淋巴细胞数；采用ＥＬＩＳＡ　表１各组小鼠血清溶血素水平的测定结果（：±ｓ，ｎ＝１Ｏ）　法检测小鼠血清ＩＬ一４、ＩＦＮ一　含量。数据统计处理同２．１。　结果见表４。　表４各组小鼠外周白细胞、淋巴细胞数和血清ＩＬ一４、　ＩＦＮ一　含量的测定（　￣４－８，ｎ＝ｌ０）　与正常组比较｛Ｐ＜０．０５，￥｝Ｐ＜０．０１；与模型组比较△Ｐ＜　０．０５．△△Ｐ＜０．０１　２．２铁皮石斛龟苓膏对免疫抑制小鼠迟发型变态反应的影　响６０只小鼠分组、给药及造模同２．１。给药２５天后，每只　小鼠腹部剃毛后，涂抹１％二硝基氟苯丙酮麻油溶液５０　与正常组比较　Ｐ＜０．０５，　｝Ｐ＜０．Ｏｌ；与模型组比较ＡＰ＜　致敏。致敏５天后，再用１％二硝基氟苯丙酮麻油溶液１０　０．０５．△△Ｐ＜０．０１　均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击，左耳涂抹丙酮麻　３结论　油溶液作对照。攻击２４小时后处死小鼠，剪下左右耳壳，同　本实验中血清溶血素测定结果显示铁皮石斛龟苓膏各　一部位取下直径８　ｌｎ＇ｌｎ的耳片称重，以左右耳片重量之差作　剂量组均能增加免疫抑制小鼠血清溶血素水平，提示其可显　为肿胀度。统计处理同２．１。结果见表２。　著增强免疫抑制小鼠体液免疫功能；迟发型变态反应结果表　表２各组小鼠耳肿胀度的比较（　±ｓ，ｎ　１Ｏ）　明中、高剂量组均能显著增强免疫抑制小鼠细胞免疫功能，　但低剂量组无统计学意义。在免疫应答过程中，ｒｎｌ细胞起　着重要的调节作用，ｒｒ｝Ｉ细胞分为Ｔｈ　细胞和１１１　细胞两个　亚群。ＩＦＮ一　是Ｔｈ，细胞分泌的主要因子，ＩＬ一４是Ｔｈ　细　胞分泌的主要因子，分别是机体细胞免疫功能和体液免疫功　能指标　。本文实验结果显示铁皮石斛龟苓膏各剂量组均　可升高免疫抑制小鼠血清ＩＬ一４和ＩＦＮ一．ｙ值，提示铁皮石　与正常组比较　Ｐ（０．０５，　｝Ｐ＜Ｏ．０１；与模型组比较△Ｐ＜　斛龟苓膏对机体特异性免疫功能具有增强作用。外周白细　０．０５．△△Ｐ＜０．０１　胞数和淋巴细胞数可直接反映机体免疫状（下转第５０５页）　中国中医药科技２０１５年９月第２２卷第５期Ｓｅｐ．２０１５　Ｖｏ１．２２　Ｎｏ．５　・５０５・　用随机数字表法随机分为双黄消痤丸高剂量组、中剂量组、　４讨论　低剂量组、阳性对照组（丹参酮）、模型对照组及正常对照　在雄激素刺激下，皮脂腺过度分泌及皮脂腺导管角化障　组。每组８只。　碍目前被认为是痤疮最主要的发病因素。血液循环中的雄　２．２模型制备按文献［１］方法建立兔耳痤疮动物模型。　激素中，以双氢睾酮的活性为最强，其次是睾酮　］。而双　除正常对照组外，其余兔左右耳内侧耳管开口处２　ｃｍ　ｘ２　ｃｍ　氢睾酮的产生又是以游离睾酮为前体，故睾酮可作为导致痤　范围，每日用玻璃棒均匀涂抹浓度为５０％煤焦油（煤焦油和　疮发病的主要激素指标。同时雌激素水平的降低，可导致雄　液体石蜡体积按１：１混合），每次０．５　ｍＬ，连续两周。自建　激素水平的相对增高，故将雌二醇亦作为对痤疮疗效评价的　模开始后第７天，于涂煤焦油处皮内注射痤疮丙酸杆菌液　重要指标。　（痤疮丙酸杆菌菌株１株，在脑心浸液培养基中转种活化并　双黄消痤丸中主要由金银花、栀子、野菊花、紫花地丁、　增殖，搜集菌落然后洗涤并过滤，调整痤疮丙酸杆菌浓度为　虎杖、黄连、柴胡、黄柏、黄芩、丹参、牡丹皮、玄参、夏枯草、赤　６×１０　・ｍＬ一，于９５℃水浴灭活５　ｍｉｎ）５０　Ｌ／耳。建模第　芍、甘草组成，具有清热解毒、凉血散结之功。现代药理学研　１４天在正常组与造模动物中随机选取动物，在其左耳相同　究发现，丹参所含成分丹参酮具有抗雄激素作用，通过抗雄　位置处用记号笔做标记，在该处以１　ｃｍ的打孔器进行兔耳　激素可以抑制皮脂腺增生及分泌过盛　；金银花除具有抗　皮肤病理活检，在显微镜下观察标本的病理结构，验证痤疮　菌、消炎、增强免疫力的作用外，还有很强的抑制皮脂腺分泌　模型复制情况。　的作用　Ｊ。　２．３给药处理造模成功后，各组动物分别给予相应药物：　本文研究结果显示，双黄消痤丸对痤疮模型兔血清雌二　双黄消痤丸高、中、低剂量组分别予消痤丸１．６８、０．８４、０．４２　醇、睾酮有明显的调节作用，可能是双黄消痤丸治疗痤疮的　ｋｇ，阳性对照药组予丹参酮０．１８７　ｇ／ｋｇ，正常对照组和模　作用机理之一。　型组给予同体积的生理盐水，每日１次，连续１４天。给药过　参考文献　程中，动物死亡４只，剩余动物见表１。　［１］彭成．中医药动物实验方法学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，　２．４观察指标检测　分别于动物末次给药２０小时后，以一　２００８：７４８—７５０．　次性５　ｍＬ注射器进行兔的立位心脏采血，离心分离血清，采　［２］Ｓａｎｓｏｎｅ　Ｇ，Ｒｅｉｓｎｅｒ　Ｒ　Ｍ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｍｔｅｓ　ｏｆ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｅｓｔ　用放射免疫法测定血清中雌二醇、睾酮含量，操作依据试剂　ｏｓｔｅｒｏｎｅ　ｔｏ　ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ　ｉｎ　ａｃｎｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎｓｋｉｎ—　盒说明进行。　ａ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ａｃｎｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｖｅｓｔ　Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１９７１，　２．５统计方法所有实验数据以（　±ｓ）表示，采用方差分　５６：３６６—３７２．　析，用ＳＰＳＳ１９．０统计软件进行统计处理。　［３］　金昕晔．睾酮水平正常的男性痤疮患者性激素水平的变化及　抗雄激素治疗效果观察［Ｊ］．第二军医大学学报，２００９，３０　３实验结果见表１。　（１０）：１１３１—１１３５．　表１　各组兔血清雌二醇、睾酮含量的测定（　±　）　［４］周华，沈勇年．丹参酮治疗痤疮及对皮脂腺和丙酸杆菌数目的　影响［Ｊ］．中华皮肤科杂志，１９９２，２５（１）：３．　［５］　于中蛟，李保强，薛承岩，等．丹参酮对女性迟发性痤疮患者血　清性激素水平的影响及疗效观察［Ｊ］．河北医药，２００９，３１（２）：　１４９—１５０．　［６］　国家药典委员会．中华人民共和国药典［Ｓ］．北京：化学工业出　版社，２００５：５２．　（收稿日期：２０１５—０２—０９）　与模型组比较・Ｐ＜０．０５，　｝Ｐ＜０．０１　（上接第４９７页）态，实验结果显示铁皮石斛龟苓膏各剂量　［３］张红玉，戴关海，马翠，等．铁皮石斛多糖对ｓ，帅肉瘤小鼠免疫　组均能增加免疫抑制小鼠外周白细胞数和淋巴细胞数，同时　功能的影响［Ｊ］．浙江中医杂志，２００９，４４（５）：３８０—３８１．　中剂量组能增强免疫抑制小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能。　［４］吴吴姝，徐健华，陈立钻，等．铁皮石斛降血糖作用及其机制　提示铁皮石斛龟苓膏对机体非特异性免疫功能具有一定的　的研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（２）：１６０—１６３．　增强作用。　［５］唐汉庆，韦祚，卢兰，等．铁皮石斛对小鼠抗氧化能力影响的　综上所述，根据《保健食品检验与评价技术规范》（２００３　实验研究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１４，２４（２１）：３０８２—３０８４．　版）中增强免疫力功能评价标准，铁皮石斛龟苓膏具有提高　［６］　中华人民共和国卫生部．增强免疫力功能、保健食品检验与　免疫功能作用，但其作用机制有待于进一步研究。　评价技术规范［Ｍ］．北京，２００３：４．　［７］张丽，李文桂，潭建蓉．日本血吸虫重组Ｂｂ疫苗不同途径免　参考文献　疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不同时间诱导的免疫应答作用［Ｊ］．吉林大学　［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典：二部［Ｓ］．北京：化学　学报：医学报，２０１５，４１（１）：７４．　工业出版社，２０１０：２６５—２６６．　（修回日期：２０１５—０６—０９）　［２］吴维佳，庞璐，胡日红，等．铁皮石斛对小鼠免疫功能的影响　［Ｊ］．湖南中医杂志，２０１２，２８（２）：１１３—１１４．