微渗析技术在药代动力学和药物代谢研究中的应用

药学学报Ａｃｔａ　ｐｈａｓｍａｃｅｕｔｌｅａ　Ｓｉｎｉｃａ　２００２，３７（４）：３１６—３２０　微渗析技术在药代动力学和药物代谢研究中的应用　丁平田　，徐　晖，郑俊民　（沈阳药科大学药学系辽宁沈阳Ｉ　ｔ００１６）　关键词：微渗析；药代动力学；药物代谢：药物分布　中图分类号：Ｒ９１７；Ｒ９６９　１　文献标识码：Ａ　文章编号：０５ｔ３—４８７０（２００２）０４　０３１６—０５　１前言　的速度通过微渗析探针，在膜的两侧则产生了浓度　）是一种在体取样技术（　梯度。如果探针周围组织中药物的浓度大于灌注液　中的浓度，药物会扩散进人探针中；相反，如果灌注　微渗析（ｍｌｃｒｏ：ｌｉｅ，　ｖｌｖｏ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ），是在线渗析技术的一个分　支：最早由美国和瑞典的研究人员首先提出了这一　概念　。他们的构思是在动物组织内植入一个“人　液中药物的浓度大于组织中的浓度，药物则由探针　内进入组织中：原理如图ｌ所示。由于灌注液的流　速一般在０．１～１０　・ｍｉｎ，探针回路中不会产生　工毛细血管”，用生理溶液（灌注液，ｐｅｆｆｕｓａｔｅ）对其进　行灌注，组织细胞间液中的分子则可以通过管壁进　压力，由此引起的超滤现象（ｕｌｔｒａ．ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）则可忽　略。物质通过渗析膜的扩散遵守Ｆｉｃｋ’ｓ扩散定　入渗析液（ｄｌａｌｙｓａｔｅ），然后通过对渗析液中的物质进　行分析来反映组织液中物质组成。　律　可以根据实验要求和药物的性质，选择应用　这一技术自８０年代初逐步发展成熟起来，首先　成为宴验精神药理学和神经生理学的一个有力的实　验工具，并为世界所公认　关于这方面的应用已　不同类型的探针进行实验。　Ｄｉａｌｙｓｂ　ｗｉａｄｏｗ　经有大量的论文发表。进入８Ｏ年代中期，特别是９０　年代后，随着分析技术和其他相关学科的发展，微渗　析技术也得到了进一步的发展，应用领域也大大拓　宽　本文介绍微渗析的原理，并对其在药学中应用　进行综述。　２微渗析的原理　Ｃｍ　微渗析的基本原理是：在肌体组织内植入一根　很细的渗析管（称为微渗析探针，ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐｒｏｂｅ），用于模拟体内细小的血管，渗析管中流动的　人工生理溶液则模拟了血液　渗析膜组成的材料有　多种，如纤维素、聚碳酸酯，醚、乙腈一甲代烯丙基磺　酸钠共聚物等，外径一般为１５０～５００　ｕｍ。渗析膜具　有一定的截留分子量（５～５０　ｋｕ），只有分子量小于　３基本概念　３．１相对回收率ｃ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ）　微渗析探针　中灌注液的连续流动导致了药物在组织液和灌注液　之间的扩散不能完垒达到平衡，药物在渗析液中的　浓度和在组织液中的浓度并不相等。相对回收率是　指药物在渗析液中的浓度（Ｃ　）和在组织液中的浓　度（Ｃ　）的比值（回收率通常意指相对回收率）　Ｂｕｎ　Ｙ等　给出了相对回收率的一般性定义：　，　＝　—截留值的化台物才可以自由通过渗析膜，在组织液　和灌注液之间进行物质交换，如小分子药物和水分　子；其他大分子则不能通过渗析膜。灌注液以一定　收稿Ｅｌ期２００１　１３６—２５　ｒ　　（Ｉ）　Ｌｍ—Ｌｌ－　式（１）中．Ｃ　是药物在灌注液中的浓度　如果Ｃ　等于零，即渗析探针中灌注的是空白　人工生理溶液（灌注液），式【１）则可以改写为：　作者简介：ｒ芈田（１９６９一），舅．博士．副斡授　‘　【：（０２４）２３９５３２２８，Ｆａｘ：（０２４）２３８８３５９５、　Ｅ－ｍａｉｌ：Ｄ　ｆｍ３６５　Ｄ　维普资讯 http://www.cqvip.com

药学学报Ａｃｌａ　ＰｈａｒｔｎａｅｅｕｔＪｃａ　Ｓｉｎｉｃａ　２００２．３７（４）：３１６—３２０　Ｒ＝　Ｃｄ　（２）　的传递率等于回收率，所以以传递率来代替回收率。　理论上，探针的回收率和传递率对于相同的药物是　相等的　这一假设正是用于在体测定探针回收率的　反向渗析法的原理。然而，事宴上情况却不总是如　３．２绝对回收量（ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ）　绝对回收量　（Ｒ．）的概念是指在一定时间内，由流经探针的渗析　液所转移带出的药物的总量　。可表示如下：　Ｒ　：Ｃ　・Ｖ　（３）　此．有许多药物的回收率和传递率并不相等　。在　这种情况下．应用反向渗析法测定的回收率是不正　确的　因此，在应用反向渗析法之前，应首先用实验　式（３）中，ｖ　是单位时间内流经探针的渗析液　的体积。　验证药物的回收率和传递率是相等的，即药物经渗　析膜的正向和反向扩散应是相等的。但很多文献中　都未对此进行验证，就应用反向渗析法进行探针回　３．３传递率【ｄｅｌｉｖｅｒｙ。Ｌｏｓｓ）药物经过渗析膜的扩　散双向进行，其净扩散的方向取决于膜两边的浓度　差。当药物在灌注液中的浓度大于探针周围环境的　浓度时，药物则由灌注液扩散进入组织液中。这种　情况下，回收率往往被称为传递率　。如果组织液　中药物的浓度相对灌注液中的浓度很低，则可以认　为Ｃ　为零，传递率可由下式表示：　一收率的测定，进而计算组织中的药物浓度，其实验结　果和结论均值得怀疑：　３．４．２零流速法　以不同的流速进行微渗析实验，　测定渗析液中药物的浓度。应用非线性回归分析的　方法来外推求得零流速时渗析液中的药物浓度，这　　【４）　物浓度。　。旦学　时可以认为回收率为ｌＯ０％，即得到了组织中的药　３．４回收率的测定在药学研究中，微渗析探针的　３．４．３近似平衡渗析法　近似平衡渗析法是应用　尽可能长的渗析膜和尽可能低的流速进行实验，来　保证药物在膜两边的扩散达到平衡，这时回收率也　是ｌＯ０％，测量得到的渗析液中的药物浓度即为组　织中细胞间液中的浓度　。　回收率是用于求得组织中药物浓度的重要参数。一　般条件下，体外回收率和体内回收率是不相等的，因　为植入组织中的探针的周围环境同水溶液中的完全　不同。在组织中包含了细胞内、细胞问以及血管、毛　细血管内的空间，与般溶液相比，药物扩散传递的　路径要长，路径的曲折程度要大，扩散系数显然要　低。此外，例如在真皮中，一些由葡糖氨基蛋白多　糖、胶原纤维、弹性纤维组成的无定形物质也会阻碍　药物扩散的进行：并且组织的某些变化和反应（如红　３．５影响回收率的因素　相对回收率的大小取决　于探针中灌注液流速：灌注液流速增大，相对回收率　降低；反之，相对回收率则升高。因为流速越低时，　药物在微渗析探针内外越接近达到平衡。绝对回收　率虽也受流速大小的影响，但关系却要复杂　些　有文献　报道，绝对回收量随灌注液流速的增大而　升高，在某一速度下达到最大值后，则随流速的增大　而降低　流速的选择不仅要使回收率大小适宜，而　且在取样时间间隔中可以取得足够体积的渗析液以　备用于药物浓度的测定。　探针的回收率与渗析膜的有效面积呈正比关　肿、血流加快）也可能导致回收率的改变。所以探针　回收率的测定是微渗析实验中的重要内容。　３．４．１　旅差法和反向渗析法　根据回收率的定义　（方程１），用　系列含不同浓度药物的灌注液进行　微渗析实验，然后以Ｃ．．一Ｃ。对Ｃ。作图，则得到一　条直线，直线的斜率就是Ｒ，横轴上的截距则为Ｃ　；　两者可以由线性回归方程分别计算出　这就是用于　计算Ｃ　和Ｒ的所谓浓差法（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎｅｔｈ０ｄ，ｌ】ＩＪ　ｎｅｔ　ｌｆｕｘ　ｍｅｔｈｏｄ）　。　。事实上，只有当Ｃｄ—　Ｃ　＞０时，药物才由探针周围环境向灌注液扩散，这　时Ｒ为回收率；当Ｃ　一Ｃ　＜０时，灌注液中的药物　向周围环境中扩散，Ｒ为传递率。反向渗析法　（ｒｅｔｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ）通常用于在体测定探针回收率，　是用系列的含不同浓度药物的灌注液对空白组织　进行微渗析实验，由于组织液中不含药物，即Ｃ　一　ｃ　＜０，这时求得的Ｒ应为传递率。同时假定药物　系，渗析有效面积越大．膜的渗析效率越高，即回收　率越高。渗析膜材料的类型、膜孔径的大小、荷电情　况等都对回收率有影响　此外温度、药物的性　质　及灌注液的组成也影响探针的回收率。　４微渗析技术在药学研究中的应用　目前微渗析技术应用的领域有神经科学、实验　药理学、糖尿病及护理、机体代谢研究、药代动力学、　药物代谢研究等。其中微渗析在药学研究中的应用　是这领域的又个研究热点，已经引起了人们的　广泛的注意。研究内容涉及药代动力学、药物代谢　和组织分布等。与传统的取样技术相比，微渗析在　维普资讯 http://www.cqvip.com

药学学报４ｅｔａ　Ｐｈａｎｒ，ａｃｅｕｔｉｌ　ａ　Ｓｉｎｉ｛；ａ　２００２．３７（４）：３１６—３２０　体取样具有无可匹敌的优势，包括以下几点　：　更小，而且还可以实现长时间内连续取样。Ｅｖｒａｒｄ　（１　微渗析技术对动物组织的损伤小，动物无组织液　等应用微渗析技术测定了苯氟布洛芬（ｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎ）　眦脑屏障的分布　。　的损失；（２）使得同时在同一动物体内监测靶组织和　血液药物浓度成为可能；（３）每一动物均用自身做对　小鼠体内静注后血药浓度　０，研究了秋水仙素通过　照，这样不仅减少了实验误差，而且实验动物数可大　大减少；（４）可以在多种器官和组织中进行实验，包　括血液；（５）微渗析测定的是药物在组织中的游离浓　随着可方便灭菌消毒的柔软、耐用型探针的出　现，已有临床上将探针植入病人动脉／静脉中进行血　液微渗析的报道。Ｐａｒｓａｌｏｓ等　进行了　系列抗癫　度，这比组织中的总浓度与药物的作用强度更具相　关性；（６）微渗析是一种连续的、不间断的取样手段，　真正做到了对组织中的药物进行实时监测；（７）微　痫药（卡马西平、苯妥英、扑癫酮、苯巴比妥）在病人　体内的药代动力学研究，实验结果表明：微渗析实验　数据的动力学图线和直接　液采样的　线相当；病　渗析可以连续进行数小时，乃至几天；（８）由于微渗　析探针膜的分离作用，大分子的机体内源性物质不　能进入渗析液，所以渗析液可以直接用高效液相色　谱法等多种技术进行分析测定．不需任何的前处理　过程；（９）在渗析液中由于　Ｊｆ＿＝存在大分子酶类，在样　品的存放和测定的过程中避免了药物被降解，保证　了药物的稳定性。　４．１经皮微渗析在过去的几年中，人们将微渗析　取样技术应用于药物经皮渗透的研究，称之为经皮　徽渗析（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ）”　。这一研究领域中　的先驱是Ｆｏｘ和Ｈｉｌｔｏｎ　，他们于１９５８年将壁上钻　有孔的注射器针头平行插入皮下，进行了缓激肽的　测定：１９７１年，又有学者利用这一技术于研究皮肤　有炎症反应时组胺的释放　。１９９１年，Ａｎｄｅｒｓｏｎ　等　对微渗析探针进行了改进，用于研究乙醇经人　体皮肤的吸收。从那时起，真正意义上的经皮微渗　析才开始应用于皮肤科的研究。早期的研究论文多　数集中于研究皮肤的病变和皮肤内源性物质的测　定，随后经皮微渗析被应用到了药物经皮吸收的研　究领域，用于研究药物的在体经皮渗透性以及局部　用制剂使用后皮肤内药物浓度的测定　。经皮　微渗析的应用可使皮肤内生化物质的变化和皮肤的　生理状态同时得以监测；可直接测定药物在靶部位　的游离浓度，与药效学相关联；不存在体内外相关性　的问题。　４．２血液微渗析　血液微渗析技术和ＨＰＬＣ或其　他分析技术（如高效毛细管电泳、质谱、液　质联用）　联用可用于动物血液中药代动力学的在线测定。由　于这一方法可用于直接测定血液中游离药物的浓　度，还可用于在体测定药物的血浆蛋白结合率。小　动物（如小鼠、大鼠）用于药代动力学研究．由于自身　有限的血液容量，用传统的取血方法每一动物只能　提供有限时间点的血样。由于微渗析取样无体液的　损失，损伤性小，可以使取样间隔缩小到数分钟乃至　人更乐意接受微渗析取样一这一研究小组还应用微　渗析技术监测左旋多巴和３—０一甲基多巴在帕金森　综合症病人体内浓度，以使给药剂量最佳化。此外　还用于人体血糖的测定　４．３　胆汁微渗析　支路型微渗析探针（ｓｈｕｎｔ　ｍｉｃｍｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐｒｏｂｅ）最初由ＳｃＯｔＩ和Ｌｕｔｔｅ　于１９９３年　设计，可用于胆汁微渗析实验　探针中的支路管可　以保持胆汁循环，渗析管穿过支管用于对胆汁连续　取样并且不会干扰胆汁的正常流动。胆汁微渗析实　验可以提供药物肝脏代谢和药代动力学的第一手信　息。在传统实验中，需长时间收集胆汁，至少４８　ｈ：　长时间取样容易引起肠道中胆酸盐的耗竭．而导致　药代动力学的改变　使用支路型微渗析探针，则可　以完全避免这类问题的出现　胆汁微渗析研究的药　物包括苯酚、乙酰氨基酚、他可林【ｔａｅｒｉｎｅ）、酚酞。　在酚酞的研究中，支路型微渗析探针的应用还保持　了该药物及其葡糖苷酸加合物的肝肠循环　４．４肿瘤组织微渗析　一般认为抗癌药物的治疗　效果与靶组织中的浓度密切相关　，因此研究测　定肿瘤部位细胞问液中药物的浓度一时间曲线具有　重要意义。实际中测定肿瘤中药物浓度的方法是组　织匀浆法，本方法繁杂、动物问差异大．并且测定的　是组织的血管中、细胞间和细胞内药物的浓度总和，　缺少专属性。近来研究人员将微渗析技术用于在体　（包括动物模型和人体实验）研究肿瘤组织中药物的　分布，取得了一定进展，所研究的药物包括氨甲蝶呤　（ＭＴＸ）、５－ＦＵ、替奠唑胺（ｔｅｍｏｚｏｌｏｔｍｄｅ）和ｄｏｘｏｒｕｂｉｎ　等。　４．５其他组织器官中的应用　微渗析可以同时用　于测定同一动物不同组织器官中游离的药物浓度，　这是其他取样技术不可能实现的　例如，如果同时　将探针植入动物的血管、肝脏和胆管中，则有可能得　到药物及其代谢产物由肝脏向血液或胆小管传递的　重要信息。　维普资讯 http://www.cqvip.com

曲学学报Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｅｅｕｔｉｅａ　Ｓｉｎｉｅａ　２００２．３７ｆ４）：３ｌ６—３２０　微渗析的应用还包括以下几种组织和器官：眼　睛、肌肉、心脏、肺、肾脏、肝脏、胰脏以及中枢神经系　ＲＥＦＥＲＥＮＣＥＳ：　［１］Ｕｎｇｅｒｓｔｅｄｔ　ｃ　Ｍｉｅｒｏｄｌｌａｙｓｉｓ：ｈｉｓｔｏ￣＇ａｎｄ　ｆｕｔｕｒｅ：Ａ　ｔｎｔｅｒａａｔｉｏ￣ｆ斯ｍｐｏｓｉａｍ。ｎ　Ｃｌｉｎｉｃａｆ　Ｍｉｃｒｏｄｉａｌ？ｓ￣￣　Ｌｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ：１９９７　２２—２５　２ｎｄ　ｃ　ｊ　统等组织中内源性和外源性物质的测定，详细内容　可以参阅文献　。　。　５微渗析原理的假设和误区　２　Ｈａｍ　ｂｕｒｇｅｒ　Ａ，Ｊａｃｏｂｏｓｎｎ　ｌ，Ｎｙｓｔｒｏｍ　Ｂ．ｅｔⅡｆ　Ｍ　ｃｒｏｄ　ａ　ｙｓ　ｓ　蛆ｍ｜］１　Ｌ　ｇ　ｏｆ　ｎｅｕ￣ｎａ［ｅｔ￣ｖｉ　ｒｏｎｍｅｎｔ　ｉｎ［￣ｒｓｉｃ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　微渗析理论的主要假设是药物通过膜传递扩散　的唯一动力是浓度梯度　。这种情况下，经过膜不　ｒｅｓｅ￣：ｈ［Ｊ］，　Ａｃｔａ　Ｄｅｍ２￣Ｍｅｄ．１９９Ｉ，Ｚ３０（２）：３７５—３８０　ｒｅｏｌ，１９９６，７６（Ｓｕｐｐｌ／：Ｉ一６１　ｌ３　Ｇｍｔｈ　Ｌ　Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｍ　ｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏ￣，ａｎｄ，＇ａｌｉｄａｔｉｏ￣ｌ　【４ｊ　Ｂｕｎｇａｙ　ＰＭ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ＰＦ，Ｄｅｄｆｉｃｋ　ＲＬ　Ｓｔｅａｄ｝＇一ｓｔａｔｅ　ｔｈｅｏ￣　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｓｏｌｕｔｅｓ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｉｎ　１．ｚ帅ａｎｄ　同方向上的扩散流量是一致的，即正向渗析和反向　渗析的流量相等。这一理论是浓差法和反向渗析法　测定回收率的基本前提：最近，膜科学中的常见因　素——超滤（ｕｌｔｒａｆｉｈｒａｔｌｏｎ）和渗透作用（ｏｓｍｏｓｉ　ｓ）被　『　人到了微渗析理论中。由于跨膜压力的存在，导致　了灌注液经膜流向周围环境（组织），而引起渗析液　的体积减少　超滤作用表现为渗析膜的表面有“出　汗”现象．其在渗析管具有较高的流体静力学阻力、　大流速或渗析膜具有较高的截留分子量时易于出　现。另一方面，由于在膜的另一边存在高浓度的大　分子物质、细胞等　『起灌注液流向周围环境，这一现　象称之为渗透作用。无论是超滤作用还是渗透作　用，这两个因素都对药物的回收率有负面的影响。　为了消除超滤和渗透作用，可以考虑以下几方　面的措施：（１）应用具有尽可能低的截留分子量的渗　析膜、低流速和较短的出口连接管路；（２）渗析膜较　长易出现超滤时，可以使用推挽式（ｐｕｓｈ—ｐｕｌ１）灌注　方式；（３）在灌注液中加人大分子（如白蛋白、右旋糖　酐等）以减少渗透压的影响．但加入的物质不应对测　定有干扰。　６结束语　微渗析技术作为一种新兴的取样技术，本身仍　有许多问题有待于进一步研究，如：（】）组织中探针　植入造成的损伤对药物代谢和动力学的影响；（２）水　溶性差的药物回收率低，对测定造成困难，要求具有　高灵敏度的检测方法；（３）定量微渗析中探针回收率　测定的方法学研究；（４）与组织具有良好相容性的新　型探针材料的研究和开发。　但无论如何，微渗析在研究中的应用提供了药　物分布的重要信息，是药物在靶组织（器官）中的代　谢和分布研究的有力工具，这一技术将在药代动力　学和药物代谢研究领域具有广阔的应用前景。此　外，随着微渗析技术的进一步发展和成熟，临床药代　动力学和药物监测也是微渗析极具潜力的应用领　域。　ｉｎ　ｎｉｔｒｏ．Ｊ．　Ｓｃｉ，Ｉ９９０，４６（２）：１０５　Ｉｌ９　［５］Ｓｔａｂｌｅ　Ｉ　．Ｓｅｇｅｒｓｖａｒｄ　Ｓ．Ｕｎｇｅ￣ｌｅｄｔ【Ｄｒｕｇ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｗｊｔｈ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ：ＩＩ　ｃａｆｆｅｉｎｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ　ｉｎ　ｂＩ　，ｂｒａｉｎ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　Ｊ　Ｓｃｉ，１９９Ｉ，　（２４）：１８４３—１９５２　ｌ６　Ｊ　Ｓｔａｂｌｅ　Ｌ，Ｓｅｇｅｒｓｖａｒｄ　Ｓ．Ｕｎｇｅｒｓｔｅｄｔ　Ｕ．Ａ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈＹｅｅ　ｍｅ【ｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏｄｉａｂ　ｓｉｓ　［Ｊ］Ｊ　ＰｈａｒｍｏｃｏｌＭｅ￣ｈｏｄｓ、１９９ｌ，２５（１）　４１—５２　７　Ｃｈｕ　Ｊ，Ｇａｌｌｏ　ＪＭ　Ａｐｐ］ｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｔｏ　ｃｈａｒａｃｔｅｆｉ￣　ｄｒｕｇ　ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔＨｍｏ／￣ｌ　Ｊ　Ｊ　Ａｄｖ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｔ　，，２０ＯＯ．４５　ｆ　２—３）：２４３—２５３　［８　Ｊ　Ｓｃｏｔｔ　ＤＯ．Ｂｅｌｌ　ＭＡ．Ｌｕｎｌ￣，ｃ　Ｍｉｃｍｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｒ【ｈｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｅｎｄｌ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　Ｊ　，　Ｐｈａｍ２　ｄＭｆ．１９８９，７（１】）：】２４９一Ｉ２５９　［９］Ｈｓｉａｏ　ＪＫ，ＢａＨ　ＢＡ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ＰＦ．　Ⅱｆ　Ｅｆｆ￣ｔｓ　ｏｆ　ｄｉｉｆｅ　ｎ【　ｓｅｍＪｐｅｍｎｅａｌｉｌｅ　ｍｅ￣ｌｈｒａｎｅｓ　ｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐｒｏｂｅｓ　ｌ　Ｊ　Ｊ，，％ｕｒｏｃｈｅｍ，１９９０，５４（１０）：１４４９　—１５０６．　１　１０］Ｓｔａｈｌｅ　Ｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｍｌｃ￣Ｎｌｉ　ｓｌｓ　ｄａｔａ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　ｐｈａｒｍｃｏ１．１９９２，４３（２）：２８９—２９４　【１１　Ｊ　Ｌ　ＬｌＴ】ｌｅ　ｃＥ．Ｓｔ－ｏＲ　ＤＯ　Ｓａｍｐｌｉｇｎ　ｌｉｖｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ　ｕｓｉｎｇ　ｍｌｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐｒｏｂｅ［Ｊ　Ｊ　ＡＭｆ　Ｃｈｅｍ，１９０１，６３（１５）：７７３：ｋ一　７鲫Ａ　【１２　Ｐｅｔｅｒ　Ｌ．Ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｌｓ——ａ　Ｈｅｗ　ａｎｄ　ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｊ．，ｍＭｅｄ．１９９１，２３０／２）：３６３—３６４　ｌ】３　Ｕｎｇｅｒｓｔｅｄｔ　Ｕ　Ｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ——ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　ａｐｐ］ｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｓｔｕｄｉｅｓ　Ｌｎ　ａｎｉｍａｌｓ　ａｎｄ　ｎｉｇｈ【Ｊ　Ｊ．，　ｃ　Ｍｅｄ．１９９１．２３０　Ｌ２）：３６５—３７３　１４ｊ　ｇｅｏＲ　ＤＯ，ｓｏ　ｎ　ＬＲ．Ｌｕｎｔｅ　ＣＥ／ｎ　ｖｉｖｏ　ｍｉｃｒｏｄＪａｌｙｓｉｓ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｔｏ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄ｝＂ｏｆ　ａｃｅｔａｍｉｎｐｈｅｎ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　Ｊｊ　，Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ，Ｉ９９０，５０６　（３　：４６ｌ一４６９　［１５］Ｆｏｘ　ＲＨ，Ｈｉｈｏｎ　Ｓ／＊ｉ　Ｂｒａｄｙｋ　ｎｉｎ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ａｓ　ａｆａｃｔｏｒ　０ｎ　ｈｅａｔ　ｖａｓｏｄｄａｔａｔｉｏｎ［Ｊ］ＪＰｈ￣ｉｏ１．Ｉ９５８，１４（１９）：　２２１９—２２３２　【１６　Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ　Ｊ．Ｇｒｅａｓｅｓ　Ｍｗ　Ｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｈｉｓｔａｍｉｎｅ　ｆｒｏｍ　ｃｕｔＥｕｌｅｏｕｓ　ａｎａｐｈｙｌａｘｉ　ｓ　ｉｎ　【Ｊ　Ｊ　Ａｃｔａ　ｍ　，　１９７１．ｓ２（１）：９８一１００　１７ｊ　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｃ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｔ．＿￣Ｉｌａａｎｄｅｒ　Ｍ　Ｅｔｈａｎｏｌ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｃｒｏｓｓ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ／ｎ　１，ｆ∞ｔｒｄｅｔｘ￣ｄｉａｌｙｓｉｓ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ：Ｊ］．＾№Ｄｅｒｍ　ｗｒ　，Ｉ９９１，７１（３）：３８９　３９３　【１８　Ａｕｌｔ　ＪＭ，Ｌｕｎｔｅ　ＣＥ，Ｍｅｌｔｚｅｒ　ＮＭ，　ａｌ　Ｍｉｃｒｏｄｌａｌ￣ｓｉｓ　ｓｍａｐｌｉｎｇ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｖｅｓｈｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｒｍａ／ｔｒａａｓｐｏｒｌ【ＪＪ　Ｐｈａｒｍ　维普资讯 http://www.cqvip.com

３２０　药学学报Ａｃｔａ￣＇ｍａｃｅｕｔｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ　２００２，３７（４）：３１６—３２０　Ｒｅｓ　１９９２，９（Ｊ０）：ｌ２５６—１２６１　ｂｒａｉｎ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌ１９］Ａｕｌｔ　ＪＭ，ＲＩｋｖ　ＣＭ，Ｍｅｈｚｅｒ　ＮＭ，ｅｔ　ｍｌｅｒｏｄｉａＪｙｓｉｓ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｉｎ　ｔ　０　Ｊ　Ｐ　ｎ　Ｄｅｒｍａｌ　ｉｎｔｒａｃｅＨｕｌａｒ　ｂｒａｉｎ　ｃｏｌｅ￣ｅｉｎｅ　ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｊ］　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，　１９９８，７８６（１）：１２２一ｌ２７　月　，１９９４，１１　（１１］：１６３１一Ｉ６３９．　［２８］Ｐａｔｓｌａｏｓ　ＰＮ，０’ｃｏｎｎ￣Ｈ　ＭＴ，Ｄｏｈｅｎｇ　ＨＣ，　８　．Ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐ・　ａＩ．Ｉｎ　ｖｉｖｏ　【２０　Ｊ　Ｍａｔｓｕｖａｍａ　Ｋ，Ｎａｋａｓｈｉｍａ　Ｍ，Ｉｃｈｉｋａｗａ　Ｍ　ｔｉｃ　ｄｒｕｇ　ｐｈａｎｎａｃｏｋｉｎｅｔｉｅｓ　ｉｎ　ｐａｆｉｅｎ￣ｗｉｔｈ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｌｐｒｏａｔｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｒＬｅｗ　ｍｉｃｒｏｄｉａｈｓｉ　ｐｒｏｂｅ：ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｏｂｓｅ￣＇ａｔｉｏｎｓ　Ｊ］　Ｎｅｕｒｏｅｈｉｒ．１９９６，６７（Ｓｕｐｐｌ　６）：５９—６２　ｃ衄　ｌＪ］ＢｉｏｌＰｈａｒｍＢｕ／／，１９９４，１７（１０）：１３９５—１３９８　［２ｌ　ｊ　Ｈｅｇｅｍａｎｎ　Ｌ，Ｆｏｒｓｔｉｇｅｒｎ　Ｃ，Ｐａｒｓｔｃｈ　Ｂ，　ＭｉｃｒｏｄｉＭｙｓｌｓ　ｉｎ　ｃｕｔｔ１１１￣ｏ１１８　ｐｈａｍｍｃｏｌｏｇｙ：ｋｋｍｔｉｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｄｅｎｕａｌｌｙ　２９］Ｓｃｏｔｔ　ＤＯ，Ｌｕｎｔｅ　ＣＥ　ｔｎ　Ｍ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｓａｍｐｌｉｇ　ｉｎｎ　ｔｈｅ　ｂｉｌｅ，ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｎｉｃｏｔｉｎｅ［Ｊ］ＪＩｎｖｅｓｔ　Ｄｅ￣ａｔｏｌ，１９９５，１０４（５）：８３９　—［Ｊ］Ｐｈａｒｍ　Ｒｅｓ　１９９３．１０（３）：３３５—３４２　８４３　［３０］Ｃｈｕ　Ｊ，Ｇａｌｌｏ　ＪＭ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｔｏ　ｅｈａｒａｃｔｅｚ＇ｉｚｅ　ｕｓｉｎｇ　ｄｅｒｍａｌ　２２］Ｃｌｏｕｇｈ　ＧＥ，Ｂｅｎｎｅ￣ＡＲ，Ｃｈｕｒｃｈ　ＭＫ　ＭｅａｓｕＹｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎｉｔｉｒｃ　‘　ｉｄｅ　ｅｏｎｃｑ：ｎｔｌ￣ｌｌＪｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ｄｒｕｇ　ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｕｍｏ￣【ＪＪ．４ｄｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｔｉｖ　Ｒｅｖ，２０００，，ｔ５　（２—３）：２４３—２５３　０ｆ　５－ｆｌｕｒｏｍｒ￣ｉｌ　ｒｅｌｅａ￣ｆｒｏｍ　ｔｈｅｎｎｏｓｅｎｓｉｉｖｅ　ｍａｇｎｅｔｆｏｌｉｐｏ・　ｍｉｅｒｏｄｉｌａｙｓｉｓ［Ｊ］．ＥｘｐＰｈｙｓｉｏｌ，１９９８，Ｓ３（５）：４３１—４３８　ｌ２３　Ｊ　Ｂｅｔｆｅｌｄｔ　Ｅ，Ｓｅｒｕｐ　ＰＪ。Ｍｅｎｎｅ　Ｔ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈａ　ｅｒ　ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｕｔａｎｅ（．Ｉ＿ｓ　ｓａｌｉｅｙｌｉｅ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ：ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｆｉｃｓ　ｕｓｉｎｇ　ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｎｎｎ・ｉｎｖａ￣ｖｅ　【３ｌ　Ｊ　Ｅｋｕｐｏｐ　Ｖ．Ｓａｔｏ　Ｈ，ＵｎｅｏＭ．ｅｔ　ａ１．Ｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ａ８８ｅ８ＳｌＴｔ．￣ｔｌｔ　ｓｏｍｅｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．ＪＤｒｕｇ　Ｔａｒｇ，ｌ９９８，ｓ（５）：３７９—３９０　ｑｕａｎｔｉｌｌｅａｔｉｎｎ　ｏｆ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　Ｊ　．肝Ｊ　Ｄｅｒｍａｔｏｌ。Ｉ９９９，　３２］Ｒｉａｅｔｔｈｏｕｓｅ　ＫＤ，Ｐｏｌｌａｃｋ　Ｇｍ　Ｍｉｅｒｏｄｉｎｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｒｕｇ　ｄｄｉｖｅｒｙ　１４０（６）：７３９—７４８．　ｔｏ　ｔｈｅ　ｅｙｅ［Ｊ］胁ＤｒｕｇＤｅｔｉｖ腑，２０００，４５（２—３）：２２９—　２４１　［２４］Ｄｉｇ　Ｐ，Ｘｕ　Ｈ。Ｚｈｅｎｎｇ　Ｊ　Ｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｓａｍｐｌｉｇ　ｃｏｕｐｌｎｅｄ　ｔｏ　ＨＰＬＣ　ｆｏｒ　ｔｒａａｓｄｅｍｍｌ　ｄｅｌｌｖｅ￣＇ｓｔｕｄ）＇ｏｆ　ｏｔｕｌａｎｄｅｔｒｏｔｔ　【３３　Ｊ　Ｐｅｎａ　ＤＩ．“ｕ　Ｐ，Ｄｅｒｅｕｄｏｆｆ　Ｈ　Ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ｐｏｆｉｐｈｅｒｄ　ｉｔｓｓｕｅｓ　Ｌ　Ｊ　２１６　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ［ＪＩ　Ｂ／ｏｍｅｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ，２００Ｏ，１４　（１）：１４１—１４３　２５　Ｊ　Ｄｉｎｇ　ＰＴ，Ｘｕ　Ｈ，Ｚｈｅｕ８　ＪＭ　Ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｆｏｒ　Ａｄｖ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ胁，２０００，４５【２—３）：１８９—　【３４　Ｊ　Ｈａｍｍａｒ］ｕｎｄ・Ｕｄｅｎａｅｓ　Ｍ　Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｄｉｎ１）－ｓｉｓ　ｉｎ　ＣＮＳ　３）：２８３—２９４　ｔｒａｎｓｄｅｎｎａｌ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｏｎｄａｎｓｅｌｒｏｎ　ｉｎ　ｒａｉｌ［Ｊ　Ｊ　Ｃｈ／ｎ　Ｐｈａｒｍ　Ｓｃ　．２０００，９（２）：８８—９１　Ｌ２６　Ｊ　Ｅｖｒａｒｄ　ＰＥ，Ｄｅｒｉｄｄｅｒ　Ｇ，　Ｖｅｒｂｅｅｅｋ　ＲＫ．　Ｉｎｔｒａｖｅｕｏｕｓ　ｄｒｕｇ　ｄｅｈｖｅｒｙ　ｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．４ｄｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ胁，２０００，４５（２　—ｃｍｄｉｌｙｓｉａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　［３５’Ｓａｗｃｈｕｋ　ＲＪ，Ｅｌｍｑｄｉｓｔ　ＷＦ　Ｍｉｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ｜ｎ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｌ［Ｊ．Ｐｈａｒｍ　Ｒｅｓ，　１９９６，Ｂ（ｔ）：１２—１７．　【２７　Ｊ　Ｅｖｒａｒｄ　ＰＥ，Ｒａｇｎｓｉ　Ｃ，Ｂｏｓｅｈｉ　Ｇ，　ａ１　Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎ　，ＤｒｕｇＤｅｌｉｔ，Ｒｅｖ，２０００，４５（２　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＮＳ［Ｊ］　Ａｄｚ一３）：２９５—３０７　ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ　ＯＦ　ＭＩＣＲＯＤＩＡＬＹＳＩＳ　ＩＮ　ＰＨＡＲＭＡＣＯＫＩＮＥＴＩＣ　ＡＮＤ　ＤＲＵＧ　ＭＥＴＡＢＯＬＩｓＭ　ＳｒｒＩＩＤⅢＳ　ＤＩＩ￣Ｇ　Ｐｉｎｇ－ｔｉａｎ，ＸＵ　Ｈｕｉ，ＺＨＥＮＧ　Ｊｕｎ—ｍｉｎ　（Ｄｅｐｏ￣ｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｎｍｃｙ，Ｓｌ￣ｎｙａｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１００１６，Ｃｈｉｎａ）　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｍｉｅｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｄｒｕｇ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；ｄｒｕｇ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ