浅谈透明质酸测定的标本采集与操作步骤

世界最新医学信息文摘２０１４年第１４卷第１期　・２３５　医学检验・　浅谈透明质酸测定的标本采集与操作步骤　邓淑芝，李简薇，姚红艳，林丽，付杰　（鸡西市人民医院，黑龙江鸡西１５８１００）　摘要：目的对透明质酸测定过程中的样本采集和操作步骤进行讨论。方法阅读相关的文献、资料，在阅读和实验检　验过程中总结经验。结论检测５２６例不同年龄、性别、无肝病史的正常人群，采用百分位数法以９５％可信度为限确　定参考值为１２０ｎｇ／ｍｌ，仅作诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。　关键词：透明质酸；采集；操作　中图分类号：Ｒ４４６　文献标识码：Ｂ　ＤＯＩ：ｌ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１—３１４１．２０１４．叭．１７６　１　原理　应用竞争抑制法和化学发光检测技术定量测定人血清　中透明质酸（ＨＡ）的含量。采用两步法反应模式：第一步是　在微孔板各孔中分别加入标准品、样本后，再加入ＨＡ结合　蛋白溶液，混匀后温育，反应中标准品、样本中的ＨＡ和包　被的ＨＡ衍生物竞争结合ＨＡ结合蛋白，反应后洗板分离未　结合在包被板上的物质。第二步加入酶结合物，与包被板　上结合的ＨＡ结合蛋白反应，温育反应后，充分洗涤除去未　结合的酶结合物，然后加入发光底物，测定每孔发光强度，　建立标准曲线，根据标准曲线回算样本中ＨＡ的含量，样本　中ＨＡ含量与发光强度成反比…。　２标本采集　采集新鲜无抗凝静脉血２　３ｍｌ，采用离心法分离出血　清。如不能及时检测，分离后的血清样本于２～８℃可保存　不超过４ｄ，一２０￣Ｃ保存可延长１个月。　推荐选用血清。样本中含有叠氮钠、微型颗粒物会影响　实验结果，同时应避免使用乳糜血、高蛋白血、低胆红素血、　轻微溶血或生物污染的血液标本。　３试剂　３．１试剂来源　郑州安图绿科生物工程有限公司提供的透明质酸定量测　定试剂盒ｆ华学发光法）。　３．２试剂组成　ＨＡ包被板：８×１２条（９６人份）或８×６条（４８人份）；　ＨＡ结合蛋白溶液：６ｍ１（９６人份）或３ｍ１（４８人份）；ＨＡ酶　结合物：１１ｍ１（９６人份）或６ｍ１（４８人份）；发光液Ａ、发光液　８各１瓶。浓缩固体洗涤剂：ｌ包。质控品（备选）：１套，０、　６０、１８０、３６０、１　０００ｎｇ／ｍ１　３．３试剂准备　使用前，试剂盒应平衡至室温。用蒸馏水将浓缩固体洗　涤剂稀释至５００ｍｌ后使用。液体试剂使用前应充分混匀。　３．４试剂保存　未开封试剂盒及其各组分保存于２　８℃，防止冷冻，　避免强光照射，有效期６个月。开封后包被板、酶结合物、　发光液、洗涤液２—８℃可保存６个月；校准品２～８℃可　保存２个月。　４仪器　Ａｎｔｈｏｓ　ｌｕｃｙ２、ＬＵＭ０发光仪（包括振荡器、洗板机、水　浴箱）。　５操作步骤　５．１实验设计　根据校准品、质控品和样本数量拆取微孔板条，在板架　上放好微孔板条。　５．２加样　前５孔依次加入由低到高浓度的标准品５０　ｌ，其余各　孔加入５０　ｌ样本。　５．３振荡　每孔分别加人ＨＡ结合蛋白溶液５０ｕｌ，在水平振荡器上　振荡３０ｓ使其混合均匀。　５．４温育　盖上封板膜，置３７ｃＣ水浴箱中温育３０ｒａｉｎ。　５．５洗板　机洗或手洗。吸出或倒出反应液，加入洗涤液洗５次（每　次加入洗液后静置时间不少于３０ｓ），洗涤液量每次每孔不　少于３００　ｌ，末次洗板后将板拍干。　５．６加酶结合物　每孔加１００Ｉｘｌ酶结合物。　５．７检测　用加样器向每孔中分别加入Ａ、Ｂ液各５０ｕｌ（共　１００ＩＸ１），振荡片刻（不少于５ｓ），避光放置（５±０．５）ｍｉｎ，　测定相对发光强度。　５．８设定孔位信息　在软件支持下将各孔位按实验需要定义，并按软件提示　输入相关信息。　６注意事项　环境相对湿度低于６０％时，应关注样本及液体试剂蒸　发浓缩对实验结果的影响。试剂盒应在有效期内使用，不　可混用不同批号试剂及过期试剂。使用前试剂需平衡至室　温。样本和试剂不能长时间于室温放置，使用后剩余组分　应迅速放回２～８ｃＣ保存　】。　实验过程中发光液和酶标记物要避免强光直射。试剂和　样本使用前要充分混匀并避免起泡，沿孔壁加样以避免外　溅或产生气泡。孵育及振荡过程中要避免微孔内水分的蒸　发，应及时盖上盖板膜。洗板时每次加入洗液量不能太多，　以免造成溢液污染加入发光液后避光放置ｆ５－Ｉ－０．５）ｍｉｎ，测　定相对发光强度，测定时室内温度应在２０～３０℃。　７方法局限性　仅作为诊断的辅助手段之一，与临床诊断应、临床检查、　病史及其他检测相结合。测定范围为０～１０００ｎｇ／ｍｌ。测　定值超过１０００ｎｇ／ｍｌ的样本，其结果是通过标准品曲线外　延得出的计算结果。如果要获得其更准确的结果，需对样　本进行稀释后重新测定。　人血清中的异嗜性抗体会与组分中的免疫球蛋白发生反　应，从而干扰检测结果。接受讨鼠单抗的诊断或治疗的患　者血清样本不适合用本方法进行检测。发生严重溶血、脂　血或浑浊的样本用于测定可能会造成不正确的结果。含有　肝素或ＥＤＴＡ等抗凝样本会对测定结果有影响。与其他厂　家产品、不同检测方法无直接可比性。　８结果判定　（下转第２３４页）　２３４　世界最新医学信息文摘２０１４年第ｌ４卷第１期　文分析出影响地高辛血药浓度的主要因素，可为医生在设　本文结果表明，从不同年龄段的统计看出：血药浓度与　年龄呈一定的正相关，血药浓度偏低的占比随年龄增大而下　降，偏高的占比随年龄增大而上升，应结合病情及时调整剂　量。　计给药方案时提供参考，使医生能设计出合理的给药方案，　减少地高辛的不良反应的发生，提高地高辛的有效使用率。　参考文献　『１］吕壬新，何传珍，李杉，主编．化学发光免疫分析洲定地高辛血药　浓度结果分析　．医院药学，２０００：４５—４６．　ｆ２１赵汉臣，主编．实用治疗药物监测手册［Ｍ１．北京：人民卫生出版社，　２００２：５０一】５６．　４结束语　地高辛的治疗范围狭窄，毒副作用大，而且血药浓度易　受多种因素的影响，因此需要进行血药浓度的监测，进行血　药浓度的监测可帮助医生判断剂量是否足量或是否过量导　致中毒。这有利于提高地高辛的药效，减少毒副作用。本　（上接第２２６页）　静脉注射可致血栓性静脉炎，因此静脉注射时一定要用　足够的注射用水稀释，速度要慢，尽可能减少血管内膜损　伤和防止漏出。　肌内注射时注射部位宜深，并应轮换注射部位，严格遵　循无菌操作，以防局部感染和脓肿形成。　用药后引起直立性低血压应卧床，血压过低可静脉滴注　去甲肾上腺素，禁用肾上腺素。　对晕动症引起的呕吐效果差。　用药期间不宜驾驶车辆、操作机械或高空作业。　７药物相互作用　氯丙嗪与乙醇或其他中枢神经系统性抑制药合用时中枢　抑制作用加强。　氯丙嗪与抗高血压药合用易致直立性低血压。如合并使　用利血平，增加患者的锥体外系反应，血压明显下降。　氯丙嗪与舒托必利合用，有发生室性心律失常的危险，　严重者可致尖端扭转心律失常。　氯丙嗪与阿托品类药合用，不良反应加强。　氯丙嗪与锂盐，如碳酸锂合用，可引起血锂浓度增高，　导致精神错乱。　氯丙嗪与抗酸药合并应用，抗酸药可以降低氯丙嗪的吸　氯丙嗪合并肾上腺素，氯丙嗪使肾上腺素的　受体的　作用受阻，１３受体的作用突出，使小动脉扩张，血压下降，　所以禁忌合并应用。如果需要抢救患者的时候，可以应用　去甲肾上腺素或异丙肾上腺素。　氯丙嗪合并麻黄碱，可以引起低血压。　氯丙嗪合并解热镇痛药，增强解热镇痛药的效果，使体　温急剧下降。　氯丙嗪合并利尿药，氯丙嗪具有１３受体的阻滞作用，　可以引起直立性低血压。　氯丙嗪合并麻醉药，可以加强患者的镇静作用，麻醉期　延长，降压作用和抑制作用加强。　氯丙嗪合并应用胰岛素、降糖药，氯丙嗪可以升高血糖，　并且合并应用可以引起肝功能的异常。　氯丙嗪合并奎尼丁，可以增强奎尼丁的作用，导致心律　失常。　、　氯丙嗪合并抗惊厥药，氯丙嗪可以降低惊厥的阈值，所　以在合并应用时，抗惊厥药剂量需要加大。　氯丙嗪合并咖啡因和茶，咖啡因和茶叶可以使氯丙嗪的　生物利用度明显下降，形成不溶解的沉淀物而不容易吸收，　导致药物的效果下降。　收，降低氯　嗪的血药浓度，使药效下降。　氯丙嗪与单胺氧化酶抑制药及三环类抗抑郁药合用时，　两者的抗胆碱能作用加强，不良反应加重。　氯丙嗪合并苯巴比妥可加快其排泄，因而减弱其抗精神　病作用，加强中枢的抑制作用。　氯丙嗪合并吗啡，加强中枢抑制作用，导致呼吸抑制。　氯丙嗪合并哌替啶，加强中枢抑制作用，引起心脏的毒　性反应，加强镇静作用。　８剂型与剂量　片剂每片５０ｍｇ，每片２５ｍｇ。　针剂每支１００ｍｇ。　参考文献　［１］杨红伟，王芳．浅谈氯丙嗪麻醉的药理作用及临床应用【Ｊ１＿中外　健康文摘，２０１３，（１１）：１９３—１９３．　［２１李艳红．阿立哌唑与氯丙嗪治疗精神分裂症疗效对照研究　中　外健康文摘，２０１３，（０７）：１８５—１８６．　（上接第２５５页）　采用线性回归拟和方式，即以标准品浓度值的对数值为　横坐标（ｘ轴），以标准品发光强度值对数值为纵坐标（Ｙ轴），　建立标准曲线（１ｏｇ—ｌｏｇ），进行计算。如需稀释的标本用生理　盐水进行稀释，所测结果乘以稀释倍数为该标本最终结果。　量很低，发生肝脏、肾脏及一些结缔组织疾病时，ＨＡ的合　成、释放增加和（或）摄取排泄障碍时会造成血中ＨＡ升高。　９临床意义　透明质酸是由葡萄糖醛酸和Ｎ一乙酰氨基葡萄糖二糖　单位为单体的直链高分子多糖，在机体内通过其黏弹性及　高度水合性等物理化学特性，以及与受体作用的生理功能　来发挥其重要作用。ＨＡ分子是由各组织内间质细胞合成，　经淋巴通路进入血液，由肝脏内皮细胞摄取降解，主要由　肾脏滤过排出。正常人ＨＡ的产生和排泄相对稳定，血中含　尤其是在判断肝病严重程度，鉴别有无肝硬化和预测其发　展趋势，ＨＡ是良好血清学指标。在反映慢性肝病向肝硬化　转化过程中肝纤维化的指标中，ＨＡ的诊断价值最佳。　参考文献　ｌｌ１张晨阳，张岩，梁文锴．丹参透明质酸凝胶混合物预防兔椎板切除　术后硬膜外粘连的安全性研究　解放军医药杂志，２０１３，２５（１）：１　８—　２Ｏ．　『２］李云慧，彭婧．尿液透明质酸酶活性检测在膀胱癌中的诊断意义　ｌＪ１．中国实用乡村医生杂志，２０１３，（１２）：５０—５１，５２．