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鸡肉中磺胺类药物残留检测方法的优化试验

2024-04-18 来源:汇智旅游网
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鸡肉中磺胺类药物残留检测方法的优化试验

作者:赵敏儿

来源:《食品安全导刊·下旬刊》2019年第01期

摘 要:对试验过程中的4个步骤进行优化,根据优化后的试验方法,可以利用高效液相色谱同时对鸡肉中7种磺胺类药物残留量进行测定,因此建立了该测定方法。结果表明,磺胺类药物在0.05~0.5 mg/L范围内峰面积与浓度主要呈现出了良好线性关系,其涉及的相关的系数均大于0.999 8;在100、200、400 μg/kg浓度的磺胺类药物的添加水平上,其回收率在81.9%~94.8%(n=7)范围内;相对标准偏差 (RSD)在2.3%~3.8%;变异系数(CV)分别低于4.0%。该方法具有前处理简单、净化效果良好、灵敏度高和定性准确等优点,满足残留分析的要求。

关键词:鸡肉;磺胺类药物;检测;优化

磺胺类药物(sulfonamides,SAs)具有对氨基苯磺酰胺结构,优点是使用方便、性质稳定、抗菌谱较广等,经常用于治疗和预防肉鸡疾病的抗菌消炎药,并且应用得非常广泛。人类经常食用的动物性食品中存在磺胺类药物的残留,磺胺类药物能够在人体内部不断蓄积,进而产生致畸、致突变、致癌作用[1]。联合国兽药法典委员会、欧盟、日本及我国等多数国家规定,动物性食品中不得超过0.1 mg/kg磺胺类药物总量及磺胺二甲基嘧啶等单个药物的含量[2-4]。

动物源性食品中SAs兽药残留量的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、液质联用法等。本研究通过优化4个试验步骤,采用高效液相色谱(HPLC)同时对鸡肉中(SD)磺胺嘧啶、(SMM)磺胺间甲氧嘧啶、(SDM)磺胺地索辛、(SM2)磺胺二甲嘧啶、(SMP)磺胺甲氧嗪、(SMZ)磺胺甲恶唑、(SQ)磺胺喹恶啉等7种磺胺类药物进行测定,该方法具有检测灵敏度高、定性准确、重现性好等优点。 1 材料准备与试验方法 1.1 试剂与仪器

磺胺类药物标准品:SD、SMM、SDM、SM2、SMP、SMZ、SQ(纯度均≥99.0%);乙腈、甲醇、正己烷、正丙醇(以上有机溶剂均为色谱纯)、磷酸、无水硫酸钠;碱性氧化铝SPE柱、0.45μm微孔滤膜。高效液相色谱仪(美国安捷伦公司Agilent1200,配紫外检测器)、高速冷冻离心机、电子天平、旋转蒸发仪、漩涡混合器、振荡器 。 1.2 试验方法 1.2.1 试验料的制备

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首先取绞碎后的鸡肉空白试料,这些作为空白的样品;再取绞碎后的鸡肉空白试料,然后添加适量浓度的标准溶液,作为加标的样品。 1.2.2 提取过程

首先称取鸡肉样品(5±0.05)g于50 mL的离心管中,然后适量加入无水硫酸钠进行搅拌直到样品略干,再加入乙腈25 mL,进行涡动混合15 s,超声提取15 min,2 500 r/min冷冻离心5 min。将上清液移至分液漏斗之中,加入正己烷30 mL,2 min进行振摇,再静止5 min,将乙腈层进行分离。用乙腈25 mL将沉淀物重复进行提取1次(冷冻离心转速改为7 000 r/min),上清液经同一份正己烷分配,合并乙腈层于100 mL鸡心瓶中,加入正丙醇5 mL(防爆沸),在50 ℃下减压浓缩至近干,用 95%乙腈3 mL对残留物进行溶解备用。 1.2.3 净化过程

先将(SPE)碱性氧化铝柱装固在固相萃取仪上,需要使用10 mL乙腈-水(95+5)先行进行预洗,然后在将旋转蒸发瓶中的备用液转移至柱上,随后在使用5 mL乙腈-水(95+5)洗涤鸡心瓶,洗涤液过柱,废液弃去。用5 mL乙腈-水(75+25)洗脱待测物至10 mL容量瓶中(轻挤干),用磷酸0.017 mol/L定容至10 mL,用0.45 μm微孔滤膜过滤,收集滤液作为试样的溶液,可供高效液相色谱测定。 1.2.4 色谱条件

色谱柱:C18250 mm×4.6 mm(i.d),5 μm粒径,或相当者。流动相:磷酸0.017 mol/L-乙腈(80+20)。流速1.0 mL/min;进样量50 μL;检测波长270 nm;柱温30 ℃。 2 优化与分析

对试验过程中的4个步骤进行优化,分析结果如下。

第一是原方法加入4 g无水硫酸钠,与样品充分搅拌后不能把水分吸干,进而影响样品提取率;因鸡肉水分含量较多,实际操作中应添加适量(大于4 g)无水硫酸钠搅拌至样品略干;第二是振荡提取与超声提取的比较,结果显示超声提取能使提取更充分,加标回收率更高,因此实际操作中使用超声的方法进行提取。第三是第二次提取时冷冻离心的转速要提高至7 000 r/min,目的是使杂质充分沉淀,有利于下一步的净化处理。第四是过净化柱收集的洗脱液不经氮吹,直接用0.017 mol/L磷酸定容后过滤膜上机检测,对比结果显示,不经过氮吹的加标回收率良好,色谱分离效果良好,可简化试验步骤,提高检测效率。 3 结果与讨论 3.1 色谱分离效果

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根据上述试验过程的4个优化步骤,测定鸡肉组织中的磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲氧嗪、磺胺甲噁唑、磺胺地索辛、磺胺二甲嘧啶。结果显示色谱峰的峰形良好,峰间隔时间比较长,能够实现基线分离,空白样品在上述条件无干扰峰出现。 3.2 标准工作曲线及线性范围

将三级标准液分别配置成0.05、0.1、0.2、0.3、0.5 mg/L的曲线浓度混合標准溶液,过0.45 μm微孔滤膜后,上机进行测定。以各色谱峰面积为纵坐标、对照溶液的浓度为横坐标,绘制标准的曲线图。7种磺胺类药物在0.05~0.5 mg/L范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,r2均大于0.999 8。 3.3 样品回收率及准确度

按照优化后的试验方法在空白鸡肉中添加浓度分别为100、200、400 μg/kg的7种磺胺类药物进行加标回收试验,结果如下:这7种磺胺类药物在81.9%~94.8%的加标回收率;其相对标准偏差 (RSD)在 2.3%~3.8%;变异系数(CV)分别低于4.0%;以各物质色谱峰信噪比 S/N>3为方法分析检测限,在鸡肉样品中,对7种磺胺类药物的检测限在10~20 μg/kg。以上结果表明该方法具有较好的回收率,较高的灵敏度、准确度和精密度。 4 结论

通过试验过程的优化,建立合适的样品提取、净化、浓缩的前处理方法,成功建立了用高效液相色谱同时测定鸡肉中7种磺胺类药物残留量,分别是:(SD)磺胺嘧啶、(SMM)磺胺间甲氧嘧啶、(SDM)磺胺地索辛、(SM2)磺胺二甲嘧啶、(SMP)磺胺甲嗪、(SMZ)磺胺甲恶唑、(SQ)磺胺喹恶啉等。采用外标法进行定量试验,确保了结果的准确度和精准度。通过这样的方法具有前处理简单,净化效果良好,回收率较高等优点,残留分析要求中灵敏度、准确度、精密度均能得到满足,并应用在该类兽药的残留监控中。 参考文献

[1]贾秀珍,申惠敏.鸡肉中磺胺药物残留风险评估[J].畜禽业,2018,345(11):43-46. [2]龙洲雄,万春花,胡海山,等.动物性食品中六种磺胺类药物残留的快速测定[J].食品科学,2007,28(11):503-505.

[3]刘佳佳,佘永新,刘洪斌,等.高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源性食品中24种磺胺类药物残留[J].分析试验室,2011,30(2):9-13.

[4]临维宣.各国食品中农药兽药残留限量规定[M].大连:大连海事出版社,2001.

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