鸡肉中磺胺类药物残留检测方法的优化试验

鸡肉中磺胺类药物残留检测方法的优化试验

作者：赵敏儿

来源：《食品安全导刊·下旬刊》2019年第01期

摘 要：对试验过程中的4个步骤进行优化，根据优化后的试验方法，可以利用高效液相色谱同时对鸡肉中7种磺胺类药物残留量进行测定，因此建立了该测定方法。结果表明，磺胺类药物在0.05～0.5 mg/L范围内峰面积与浓度主要呈现出了良好线性关系，其涉及的相关的系数均大于0.999 8;在100、200、400 μg/kg浓度的磺胺类药物的添加水平上，其回收率在81.9%～94.8%（n=7）范围内;相对标准偏差 （RSD）在2.3%～3.8%;变异系数（CV）分别低于4.0%。该方法具有前处理简单、净化效果良好、灵敏度高和定性准确等优点，满足残留分析的要求。

关键词：鸡肉;磺胺类药物;检测;优化

磺胺类药物（sulfonamides，SAs）具有对氨基苯磺酰胺结构，优点是使用方便、性质稳定、抗菌谱较广等，经常用于治疗和预防肉鸡疾病的抗菌消炎药，并且应用得非常广泛。人类经常食用的动物性食品中存在磺胺类药物的残留，磺胺类药物能够在人体内部不断蓄积，进而产生致畸、致突变、致癌作用[1]。联合国兽药法典委员会、欧盟、日本及我国等多数国家规定，动物性食品中不得超过0.1 mg/kg磺胺类药物总量及磺胺二甲基嘧啶等单个药物的含量[2-4]。

动物源性食品中SAs兽药残留量的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、液质联用法等。本研究通过优化4个试验步骤，采用高效液相色谱（HPLC）同时对鸡肉中（SD）磺胺嘧啶、（SMM）磺胺间甲氧嘧啶、（SDM）磺胺地索辛、（SM2）磺胺二甲嘧啶、（SMP）磺胺甲氧嗪、（SMZ）磺胺甲恶唑、（SQ）磺胺喹恶啉等7种磺胺类药物进行测定，该方法具有检测灵敏度高、定性准确、重现性好等优点。 1 材料准备与试验方法 1.1 试剂与仪器

磺胺类药物标准品：SD、SMM、SDM、SM2、SMP、SMZ、SQ（纯度均≥99.0%）;乙腈、甲醇、正己烷、正丙醇（以上有机溶剂均为色谱纯）、磷酸、无水硫酸钠;碱性氧化铝SPE柱、0.45μm微孔滤膜。高效液相色谱仪（美国安捷伦公司Agilent1200，配紫外检测器）、高速冷冻离心机、电子天平、旋转蒸发仪、漩涡混合器、振荡器 。 1.2 试验方法 1.2.1 试验料的制备

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首先取绞碎后的鸡肉空白试料，这些作为空白的样品;再取绞碎后的鸡肉空白试料，然后添加适量浓度的标准溶液，作为加标的样品。 1.2.2 提取过程

首先称取鸡肉样品（5±0.05）g于50 mL的离心管中，然后适量加入无水硫酸钠进行搅拌直到样品略干，再加入乙腈25 mL，进行涡动混合15 s，超声提取15 min，2 500 r/min冷冻离心5 min。将上清液移至分液漏斗之中，加入正己烷30 mL，2 min进行振摇，再静止5 min，将乙腈层进行分离。用乙腈25 mL将沉淀物重复进行提取1次（冷冻离心转速改为7 000 r/min），上清液经同一份正己烷分配，合并乙腈层于100 mL鸡心瓶中，加入正丙醇5 mL（防爆沸），在50 ℃下减压浓缩至近干，用 95%乙腈3 mL对残留物进行溶解备用。 1.2.3 净化过程

先将（SPE）碱性氧化铝柱装固在固相萃取仪上，需要使用10 mL乙腈-水（95+5）先行进行预洗，然后在将旋转蒸发瓶中的备用液转移至柱上，随后在使用5 mL乙腈-水（95+5）洗涤鸡心瓶，洗涤液过柱，废液弃去。用5 mL乙腈-水（75+25）洗脱待测物至10 mL容量瓶中（轻挤干），用磷酸0.017 mol/L定容至10 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，收集滤液作为试样的溶液，可供高效液相色谱测定。 1.2.4 色谱条件

色谱柱：C18250 mm×4.6 mm（i.d），5 μm粒径，或相当者。流动相：磷酸0.017 mol/L-乙腈（80+20）。流速1.0 mL/min;进样量50 μL;检测波长270 nm;柱温30 ℃。 2 优化与分析

对试验过程中的4个步骤进行优化，分析结果如下。

第一是原方法加入4 g无水硫酸钠，与样品充分搅拌后不能把水分吸干，进而影响样品提取率;因鸡肉水分含量较多，实际操作中应添加适量（大于4 g）无水硫酸钠搅拌至样品略干;第二是振荡提取与超声提取的比较，结果显示超声提取能使提取更充分，加标回收率更高，因此实际操作中使用超声的方法进行提取。第三是第二次提取时冷冻离心的转速要提高至7 000 r/min，目的是使杂质充分沉淀，有利于下一步的净化处理。第四是过净化柱收集的洗脱液不经氮吹，直接用0.017 mol/L磷酸定容后过滤膜上机检测，对比结果显示，不经过氮吹的加标回收率良好，色谱分离效果良好，可简化试验步骤，提高检测效率。 3 结果与讨论 3.1 色谱分离效果

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根据上述试验过程的4个优化步骤，测定鸡肉组织中的磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲氧嗪、磺胺甲噁唑、磺胺地索辛、磺胺二甲嘧啶。结果显示色谱峰的峰形良好，峰间隔时间比较长，能够实现基线分离，空白样品在上述条件无干扰峰出现。 3.2 标准工作曲线及线性范围

将三级标准液分别配置成0.05、0.1、0.2、0.3、0.5 mg/L的曲线浓度混合標准溶液，过0.45 μm微孔滤膜后，上机进行测定。以各色谱峰面积为纵坐标、对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准的曲线图。7种磺胺类药物在0.05～0.5 mg/L范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系，r2均大于0.999 8。 3.3 样品回收率及准确度

按照优化后的试验方法在空白鸡肉中添加浓度分别为100、200、400 μg/kg的7种磺胺类药物进行加标回收试验，结果如下：这7种磺胺类药物在81.9%～94.8%的加标回收率;其相对标准偏差 （RSD）在 2.3%～3.8%;变异系数（CV）分别低于4.0%;以各物质色谱峰信噪比 S/N>3为方法分析检测限，在鸡肉样品中，对7种磺胺类药物的检测限在10～20 μg/kg。以上结果表明该方法具有较好的回收率，较高的灵敏度、准确度和精密度。 4 结论

通过试验过程的优化，建立合适的样品提取、净化、浓缩的前处理方法，成功建立了用高效液相色谱同时测定鸡肉中7种磺胺类药物残留量，分别是：（SD）磺胺嘧啶、（SMM）磺胺间甲氧嘧啶、（SDM）磺胺地索辛、（SM2）磺胺二甲嘧啶、（SMP）磺胺甲嗪、（SMZ）磺胺甲恶唑、（SQ）磺胺喹恶啉等。采用外标法进行定量试验，确保了结果的准确度和精准度。通过这样的方法具有前处理简单，净化效果良好，回收率较高等优点，残留分析要求中灵敏度、准确度、精密度均能得到满足，并应用在该类兽药的残留监控中。 参考文献

[1]贾秀珍，申惠敏.鸡肉中磺胺药物残留风险评估[J].畜禽业，2018，345（11）：43-46. [2]龙洲雄，万春花，胡海山，等.动物性食品中六种磺胺类药物残留的快速测定[J].食品科学，2007，28（11）：503-505.

[3]刘佳佳，佘永新，刘洪斌，等.高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源性食品中24种磺胺类药物残留[J].分析试验室，2011，30（2）：9-13.

[4]临维宣.各国食品中农药兽药残留限量规定[M].大连：大连海事出版社，2001.

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