检出一株产IMP-4型金属酶放射根瘤菌

１０６　南昌大学学报（医学版）２０１１年第５１卷第１２期　Ｊｏｕｒｎａｌ　０ｆ　Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｅｉｅｎｃｅ）２０１１，Ｖｏ１．５１　Ｎ０．１２　检出一株产ＩＭＰ－４型金属酶放射根瘤菌　陈振华　，刘文恩　（１江西省妇幼保健院新生儿筛查中心，南昌３３０００６；２中南大学湘雅医院检验科，长沙４１０００８）　关键词：ＩＭＰ一４；金属酶；放射根瘤菌　中图分类号：Ｒ３７２　文献标志码：Ｂ　文章编号：１０００－－２２９４（２０１１）１２－－０１０６－－０１　金属ｐ一内酰胺酶简称金属酶，产ＩＭＰ一４型金属　酶细菌多见于鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠　杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌和柠檬酸杆菌属。笔　者从１例住院患者支气管分泌物中分离出一株产　ＩＭＰ－４型金属酶的放射根瘤菌，报告如下。　１　临床资料　患者，女，２个月，在２００９年３月中南大学湘雅　医院诊断为先天性心脏病动脉导管未闭，入院时体　温３９．７℃，呼吸５０次・ｒａｉｎ＿。，体质量４．９　ｋｇ。血　常规：红细胞５．４×１０化Ｌ　，血红蛋白１１２　ｇ・Ｌ　，　白细胞１５．５×１０。Ｌ一，中性粒细胞占５１．８　，淋巴　细胞占４７．４　；尿常规、粪常规及血液生化未见异　常。支气管分泌物细菌培养，２次鉴定结果均为放　射根瘤菌，使用氨曲南治疗后患儿感染症状好转，　４　ｄ后出院。　２细菌鉴定及药敏试验　２．１　仪器法细菌鉴定及药敏试验　支气管分泌物接种麦康凯琼脂和血琼脂平板，　３５℃培养２４　ｈ，麦康凯平板上呈中等大小无色黏液　菌落，血平板长出灰白色、光滑、扁平、湿润、直径　２　ｍｍ的菌落，菌落周围有轻微草绿色溶血，经革兰　染色、ＫＯＨ拉丝试验确证为阴性杆菌，菌体形态规　则，触酶（一），氧化酶（一），动力（＋），经法国生物梅　里埃公司ＧＮ鉴定卡和ＡＳＴ—ＧＮＯ４药敏卡在　ＶＩＴＥＫ２全自动鉴定药敏分析系统进行鉴定和药敏　试验。金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３、大肠埃希菌　ＡＴＣＣ２５９２２和铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ２７８５３作为药　敏实验质控菌株。鉴定为放射根瘤菌，鉴定可信度　为９９　。药物敏感性试验结果显示：对氨苄西林、　哌拉西林、氨苄西林／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、　头孢他啶、头孢噻肟和头孢吡肟耐药，对亚胺培南、　美罗培南、氨曲南、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、　环丙沙星和左氧氟沙星敏感。　２．２金属酶表型检测及其基因检测　金属酶的表型检测，采用改良Ｈｏｄｇｅ试验，参　考文献［卜２］进行，作部分改进，其中美罗培南纸片　购自英国Ｏｘｏｉｄ公司。采用蛋白酶Ｋ法提取细菌　ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板，参照文献［２］设计特异性引　物，反应条件为：９４℃变性３　ｍｉｎ，以９４℃变性　３０　Ｓ、５２℃退火６０　Ｓ、７２℃延伸１　ｒａｉｎ，进行３Ｏ个循　环；最后７２℃延伸２　ｍｉｎ。ＰＣＲ产物送上海Ｉｎ—　ｖｉｔｒｏｇｅｎ公司纯化后双向测序，用核酸序列比对软　件ｂｌａｓｔｎ在ＧｅｎＢａｎｋ数据库中比对，确定基因型　别。金属酶表型检测发现大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２　的抑菌圈出现苜蓿叶状，表明表型检测阳性。ＰＣＲ　结果显示ＩＭＰ基因扩增阳性，ＰＣＲ阳性产物长度　为７４１　ｂｐ。测序结果经ＢＬＡＳＴ检索分析，与Ｇｅｎ—　Ｂａｎｋ中ＩＭＰ一４（ＡＦ２８８０４５．２）编码基因序列的同源　性为１００　，证实为ＩＭＰ－４基因。　３讨论　放射根瘤菌可引起植物根瘤菌和根须瘤，一般　对人不致病，但当人体免疫力低下时易造成机会感　染　一。该菌的检出，提示在感染性标本分离培养过　程中，应考虑到越来越多的非致病菌正在转为机会　感染菌的倾向。由于ＩＭＰ一４型金属酶基因位于Ｉ　类整合子上，可被插入到可接合质粒中，通过各种方　式在其他细菌体内得到表达，极易造成广泛传播，将　使得携带有ＩＭＰ一４耐药基因的质粒在环境中大量　存在。ＩＭＰ一４型金属酶能水解青霉素类、头孢菌素　类和碳青霉烯类抗生素，而目前对产金属酶酶细菌　的治疗目前尚无特别有效的药物，所以产ＩＭＰ一４型　金属酶放射根瘤菌引起的感染应该引起临床医生的　高度重视。　本资料由第一作者在中南大学湘雅医院学习时获得　参考文献：　ｒ１］　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｎｄ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｓｔａｎｄ—　ａｒｄｓ　ｆｏｒ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ；ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ　ｉｎｆｏｒ—　ｍａｔｉｏｎａｌ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ［Ｊ］．ＣＬＳＩ（Ｍ１００２Ｓ２１９），２００９，２９（３）：４６—　４７．　［２３　Ｊｅｏｎｇ　Ｓ　Ｈ，Ｂａｅ　Ｉ　Ｋ，Ｐａｒｋ　Ｋ　０，ｅｔ　ａ１．Ｏｕｔｂｒｅａｋｓ　ｏｆ　ｉｍｉｐｅｎｅｍ—ｒｅ—　ｓｉｓｔａｎｔ　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｂａｕｍａｎｎｉｉ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ　ｉｎ　Ｋｏｒｅａ￣Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２００６，４４（４）：４２３—４３１．　［３］张华平，樊冀闽，黄东红，等．放射根瘤菌感染六例临床特点分　析［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２０１０，３３（２）：９３—９８．　（责任编辑：钟荣梅）