紫荆花总黄酮提取工艺的优化研究

时珍国医国药２００７年第ｌ８卷第１１期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００７　ＶＯＬ．１８　ＮＯ．１１　紫荆花总黄酮提取工艺的优化研究　徐美奕　，韩雅莉　，陈志红　（１．广东医学院分析中心，广东湛江５２４０２３；　２．广东工业大学轻工化工学院，广东广州５１０００６）　摘要：目的筛选紫荆花总黄酮的最佳提取工艺条件。方法通过水提、水提醇沉、醇提及酸醇提取４种工艺比较，确定采　用醇提工艺；采用ｋ（３　）正交试验来确定醇提优化提取工艺条件。结果紫荆花总黄酮的优化提取工艺条件为ｌ５倍量　５５％乙醇、１００℃水浴、每次２　ｈ回流提取３次，总黄酮平均得率为７．３２％，ＲＳＤ为１．４４％～１．８８％。结论优化提取工艺　简单、稳定、可行。　关键词：紫荆花；总黄酮；提取；正交实验　中图分类号：Ｒ２８４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０８０５（２００７）１１－２７１２－０２　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　Ｓｔｕｄｙ　Ｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｅｒｃ￣ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｂｇｅ　ｘｕ　Ｍｅｉ．ｙｉＩ，　ＨＡＮ　Ｙａ．１ｉ　，ＣＨＥＮ　ｚｈｉ．ｈｏｎｇ　．（１．Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｃｅｎｔｅｒ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈａｎｉｆａｎｇ５２４０２３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｆａｃｕｌｔｙ　ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒ－　ｉｎｇ　ａｎｄ　Ｌｉｇｈｔ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅ￣ｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０００６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｔａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｃｅｒｃｉｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｂｇｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｃｏｍ．　ｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　４　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ，ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｃｉｄ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘ　．ｒｔａｃｔｉｏｎ，ｆｏｒ　ｔｏｔｌ　ｆａｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ．Ｔｈｅ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ａｎｄ　ｃｏｒｇｉｍｅｄ　ｂｙ　ｋ（３　）ｒ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｏｔｌ　ｔａｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｃｅｒｃｉｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｂｇｅ　ｗｅｒｅ　１５　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　５５％ｅｔｈｙｌ　ｌｃｏｈｏｌ，２　ｈ　ｈｏｔａ　ｗａｔｅｒ　ｒｅｆｌｕｅｎｃｅ　ａｔ　１００℃ｆｏｒ　３　ｔｉｍｅｓ．Ａｖｅｒａｇｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｏｔｌ　ｆａｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　７．３２％．ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ＲＳＤ　ｗａｓ　１．４４％～１．８８％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ　ｓｉｍｐｉｅ．ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｅｒｃｉｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｂｇｅ；Ｔｏｔｌ　ｆａｌａｖｏｎｏｉｄｓ；　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　黄酮类化合物广泛存在于许多植物中，具有多样生物活性，　并滤液，抽滤。滤液减压浓缩至原体积的１／６，加入３倍量无水　尤其在治疗心血管疾病方面有强心、抗心肌缺血、扩张血管、降　乙醇，４￣Ｃ放置２４　ｈ沉淀，抽滤，滤液减压浓缩，真空干燥。　压、抗心律失常、降血脂、抗动脉粥样硬化等多种作用，能有效抑　２．１．３醇提称取花粉１０　ｇ，加２０倍量７５％乙醇，１００℃回流２　。紫荆花Ｃｅｒｃｉｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｂｇｅ　ｈ，纱布过滤，滤渣中再加７５％乙醇１００　ｍｌ于１００℃回流２　ｈ，重复　系豆科植物紫荆的花，具有清热、凉血、去风解毒的功效，可用于　１次，合并滤液，抽滤。滤液减压浓缩，真空干燥。　治疗风湿筋骨疼痛，外用治疗鼻中疳疮，民间应用紫荆花治疗血　２．１．４酸醇提取称取花粉１０　ｇ，加２０倍量７５％乙醇，调ｐＨ为　小板减少性紫癜　』。紫荆花总黄酮的提取研究在国内外文献　３～４，１００℃回流２　ｈ，纱布过滤，滤渣中再加７５％乙醇（ｐＨ３～４）　尚未见报道，本研究以总黄酮含量（得率）为考察指标，筛选其优　１００ｍｌ于１００ｏＣ回流２　ｈ，重复１次，合并滤液，抽滤。滤液减压浓　化提取工艺，为进一步研究开发提供实验依据。　缩，真空干燥。　１仪器与材料　２．２含量测定　１．１仪器ｕＶ　２３１０１ＰＣ型分光光度计（日本岛津公司），ＦＳ８６２Ａ　２．２．１标准曲线的制备　精确称取干燥至恒重的芦丁对照品　型药物粉碎仪（浙江），Ｒ２０５Ｂ型旋转蒸发仪（上海申生科技有限　５．０　ｍｇ于２５　ｍ１容量瓶中，用乙醇溶解、定容。分别取１．０，２．０，　公司）；ｓｕＰＥＲＭ０ＤｕＬＹ０型冷冻干燥机（英国ＥＤＷＡＲＤＳ公司）。　３．０，４．０，５．０，６．０，７．０　ｍｌ标准品溶液于２５　ｍｌ容量瓶中，加入　１．２对照品芦丁对照品由Ｓｉｇｍａ公司提供。　５％亚硝酸钠溶液１　ｍｌ，摇匀，放置６　ｍｉｎ，加入１０％硝酸铝溶液１　１．３药材紫荆花采集于广东医学院校园内，采集时间为２００６—　ＩＴＩｌ，摇匀，放置６　ｍｉｎ，加入１０％氢氧化钠ｌ０　ｍｌ，加水至刻度，摇　１１—１２。采摘干净的紫荆花置于阴凉通风处晾干，摘除花柄，用　匀，放置１５　ｍｉｎ。在５１０　ｎｎｌ波长测定吸光度，以芦丁标准品溶液　不锈钢剪刀将花瓣剪碎，粉碎，密封后置一２０℃保存备用。　浓度（Ｃ）为横坐标，吸光度（Ａ）为纵坐标，得回归方程为Ａ＝　１．４试剂所有实验试剂均为分析纯。　１４．１６３Ｃ一０．ＯＯ４　５，相关系数ｒ＝０．９９９　２。　２方法与结果　２．２．２样品总黄酮含量的测定精确称取不同方法提取的浸膏　２．１不同提取工艺实验　粉末，用７０％乙醇溶解并定容至２５　ｍｌ，分别吸取３　ｍｌ于２５　ｍ１容　２．１．１水提称取紫荆花粉１０　ｇ，加２０倍量双蒸馏水，于ＩＯ０￣Ｃ　量瓶中，按标准曲线制备各项处理，在５１０　ｎｍ波长测定吸光度，　水浴回流２　ｈ，纱布过滤，滤渣中再加双蒸馏水１００　ｒｎｌ于ＩＯ０￣Ｃ回　代人回归方程，计算总黄酮含量。总黄酮含量见表１，单因素方　　流２　ｈ，重复１次，合并滤液，抽滤。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩，　差分析见表２。制血小板聚集和防治血栓形成　真空干燥。　２．１．２水提醇沉称取花粉１０　ｇ，加２０倍量水１００ｏＣ回流２　ｈ，　纱布过滤，滤渣中再加水１００　ｍｌ于ＩＯ０￣Ｃ回流２　ｈ，重复１次，合　收稿日期：２００７－４－００２；修订日期：２００７－０６　１５　基金项目：广东省湛江市科技攻关资助项目（Ｎｏ．２００５０４２）　作者简介：徐关奕（１９６７一），男（汉族），广东湛江人，现任广东医学院高级　ｎ＝３　表１不同提取工艺实验结果　％　实验师，在读硕士，主要从事应用化学研究工作．　・从表ｌ结果可见，以生药总黄酮得率为评价指标，较佳的提　２７ｌ２・　维普资讯 http://www.cqvip.com

ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００７　ＶＯＬ．１８　ＮＯ．１１　时珍国医国药２００７年第１８卷第１１期　　取工艺为酸醇提取法和醇提法，考虑到实际操作上酸碱对仪器的　无显著性影响。２优化工艺验证实验为了考察优化提取工艺的稳定性，按　腐蚀，优选乙醇提取工艺。从表２结果可见，各提取工艺问有显　２。３。Ｂ。Ｃ　Ｄ　的工艺条件进行３次重复性实验。结果见表６。　著性差异（Ｐ＜０．０１）。　表２单因素方差分析表　表５方差分析结果　２。３醇提优化工艺研究　２。３．１正交实验根据黄酮提取条件，选取提取温度（Ａ）、乙醇　浓度（Ｂ）、提取时间（ｃ）、溶剂用量（Ｄ）４个因素，各取３个水平，　进行　（３　）正交实验，回流次数３次，因素水平见表３，以生药总　黄酮得率为考察指标。结果见表４，方差分析见表５。　表３因素水平　实验号　总黄酮得率船　ｎ＝３　从表６结果可见，采用优化工艺提取的紫荆花总黄酮得率均　高于正交试验表中的任何一组，说明优选工艺稳定可行。　３讨论　３。１　提取工艺的筛选紫荆花分别采用水提、水提醇沉、醇提及　酸醇提取４种工艺提取总黄酮，实验发现酸醇提取法和醇提法的　提取效果较高，考虑到酸碱的腐蚀性，选取醇提工艺。　３。２醇提优化工艺条件的确定通过选取提取温度、乙醇浓度、　提取时间、溶剂用量４个因素，各取３个水平，进行ｋ（３　）正交　试验来确定紫荆花总黄酮的优化提取工艺条件为：采用１５倍量　５５％乙醇、１００℃水浴、每次２ｈ回流提取３次；４个因素对提取效　果的影响程度依次为：乙醇浓度＞温度＞提取时间＞溶剂用量；　按优化工艺进行重复性实验，紫荆花总黄酮得率为７．２８％～　７．３５％，平均得率为７．３２％，ＲＳＤ为１．４４％～１．８８％，结果提示　优选工艺稳定可行，研究结果表明紫荆花中总黄酮的含量较高，　具有一定的开发与应用前景。　参考文献：　ｊ　１　Ｉ　ＩＪａｎｄ０ｌｆｉ　Ｒ．，Ｍｏｗｅｒ　Ｒ　Ｌ，Ｓｔｅｉｎｅｒ　Ｍ．Ｍｏｄｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｈｓｍ　ｂｙ　ｂｉｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ１　Ｊ］．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ—ａｃｔｉｖ．　ｉｔｙ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０００，３３（９）：１５２５．　［２］　Ｖｅｒｍｙｌｅｎ　Ｊ，Ｂａｄｅｎｈｏｒｓｔ　Ｐ　Ｎ，Ｄｅｃｋｍｙｎ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｒｍａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　表４结果表明，由极差Ｒ可知温度（Ａ）、乙醇浓度（Ｂ）、提取　　１３　Ｊ　Ｍａｃｆａｒｌｎｅ　Ｓ　Ｒ，Ｓｅａｕｅｒａ　Ｍ　Ｊ，Ｋａｎｋｅ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　时间（Ｃ）、溶剂用量（Ｄ）４个因素对紫荆花总黄酮的影响程度不　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｅｌ　Ｒｅｖ，２００１，５３（２）：２４５．　同，各因素的影响程度依次为：乙醇浓度（Ｂ）＞温度（Ａ）＞提取　［４］　钱正清．最新中药大辞典［Ｍ］．北京：中国中医药出版社，　时间（Ｃ）＞溶剂用量（Ｄ）；实验优方案为　Ｂ。Ｃ　Ｄ　，即紫荆花总　２００５：２３６５．　黄酮的优化提取工艺为：采用５５％乙醇，提取温度为１００￣（２，回流　［５］　李尚德，关雄泰．紫荆花红色素的提取及性能测试［Ｊ］．化学世界，　１９９６，８：４１６．　２　ｈ提取３次，溶剂用量为１５倍。　　元晓梅，蒋明蔚．聚酰胺吸附一硝酸铝显色法测定山楂及山楂制　从表５结果可见，乙醇浓度（Ｂ）对总黄酮提取有显著影响（Ｐ　［６］品中的总黄酮含量［Ｊ］．食品与发酵工业，１９９６，４：２７．　＜０．０５），而温度（Ａ）、提取时间（Ｃ）、溶剂用量（Ｄ）３个因素则　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｌｉｎＨａｅｍａｔｏｌ，１９９３，１２（１）：１０７．　・２７１３・