丁胺卡那霉素对EDTA依赖性凝集血小板的解离及其机制

临床检验杂志２００８年第２６卷第６期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２００８，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．６４２９文章编号：１００１－７６４Ｘ（２００８）０６－０４２９－０３中图分类号：Ｒ４４６．１１文献标识码：Ａ・论著・丁胺卡那霉素对ＥＤＴＡ依赖性凝集血小板的解离及其机制木周小棉ｈ，赖金甜２，张伟红ｈ，邓伟雄１ｂ（１．广州医学院附属广州市第一人民医院ｌａ．检验科，１ｂ．干部外科，广州５１０１８０；２．广州医学院医学检验系）摘要：目的研究丁胺卡那霉素对ＥＤＴＡ抗凝剂依赖的聚集血小板的解离作用和机制，为血常规标本中血小板凝聚提供可靠的解决方法。方法在ＥＤＴＡ依赖的假性血小板减少症（眦Ｐ）患者的ＥＤＴＡ．１（２抗凝血样本中，于不同时间段加入不同浓度丁胺卡那霉素进行凝集血小板的解离试验，通过血小板计数和涂片观察解离效果；用流式细胞仪检测血小板膜表面ＣＤ４１、ＣＤ６ｌ、ＣＤ６２ｐ、ＰＡＣ－１和ＩｇＧ的表达百分率。结果抽血后１ｈ内加入丁胺卡那霉素对血小板凝集的解离作用明显，血小板计数可恢复到即时检测的水平，血小板ＣＤ６２ｐ、ＰＡＣ．１和ＩｇＧ的表达量被显著抑制，而ＣＤ４１和ＣＤ６１未受明显影响。结论Ｐ１陀Ｐ患者血常规样品抽血后ｌｈ内加入丁胺卡那霉素能有效解离凝集的血小板，作用机制可能与抑制患者血小板膜表面ＣＤ６２ｐ、ＰＡＣ－１和ＩｇＧ的表达有关；此法有助于解决ＥＤＴＡ所致的血小板计数的假性减少。关键词：假性血小板减少；血小板聚集；丁胺卡那霉素；解离血细胞计数常用的抗凝剂ＥＤＴＡ盐易导致血小板计数假性减少，发生率为０．０７％一２％［１３。由于其形成原因较复杂［】圳，如何解决是临床实验室研究者１ＰＬＴ为２０４Ｘ１０９／Ｌ，患者２ＰＬＴ为５８×１０９／Ｌ，与采用末梢血手工计数ＰＬＴ数基本一致。１．３方法（１）用ＥＤＴＡ—Ｋ：抗凝管分别抽取两名患者静脉血各２ｍｌ，用ＡＤＶＩＡ２１２０分别于即时、０．５、１、１．５、２、２．５、３ｈ）检测各管血小板数。（２）在的重要课题，我们曾就此进行过相关研究心刮。本研究主要是针对ＥＤＴＡ诱导血小板凝集，使血小板假性减少的情况，对２例抗凝剂依赖的假性血小板减少症（ＰＴＣＰ）患者的凝集血小板的解离和机制进行了研究，现将结果报道如下。１材料和方法１．１试剂和仪器ＥＤＴＡ—Ｋ：抗凝剂真空采血管由广州阳普公司提供；丁胺卡那霉素由齐鲁制药公司两名患者ＥＤＴＡ—Ｋ：抗凝血标本放置的不同时间段（Ｏ．５、１、１．５、２、２．５ｈ），加入两种不同浓度的丁胺卡那霉素（６．５ｍｇ／ｍｌ和１０．０ｍｓ／ｍ１），混匀放置０．５ｈ后测定各管血小板数，以同时间段未加丁胺卡那霉素的ＥＤＴＡ－Ｋ：抗凝血对照。（３）分别在患者的ＥＤ－ＴＡ・Ｋ：抗凝血中即时、放置１ｈ和２ｈ加入６．５ｍｓ／ＩＩｌｌ丁胺卡那霉素，放置２．５ｈ后用流式细胞仪分析ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ６２ｐ、ＰＡＣ一１和ＩｇＧ的表达。以同时间段不加丁胺卡那霉素的ＥＤＴＡ—Ｋ：抗凝血为对照。１．４统计学分析用ＳＰＳＳ１３．０统计学软件包。生产；全自动血液分析仪（拜尔ＡＤＶＩＡ２１２０）和流式细胞仪（美国ＢＤ－ＦＡＣＳｃａｎｔｏ）均使用原厂配套试剂和质控品。１．２对象患者１，男，成年人，因多次用ＥＤＴＡ—Ｋ抗凝血测得血小板数低于参考值，结果与临床表现不符，诊断为多种抗凝剂所致的假性血小板减组间均值比较用ｔ检验，Ｐ＜０．０５有统计学意义。２结果２．１少旧Ｊ。患者２，女，成年人，因特发性血小板减少住院治疗，临床表现无出血症状，但血液分析仪测得血小板数（１９ｘＥＤＴＡ—Ｋ：抗凝剂对血小板计数的影响两患者的血小板数随着标本放置时间的延长而下降，结果见图１。在血涂片中，随时间延长血小板成堆凝聚现象明显增加。１０９／Ｌ），给予激素治疗无效，后发现血涂片上有血小板凝集现象，经进一步证实此患者为特发性血小板减少并有ＥＤＴＡ抗凝剂依赖性血小板减少现象。用ＥＤＴＡ・Ｋ：管抽血后应即检查，测得患宰基金项目：广东省科技厅项目（７３０９０）；广东省医学科研基金（Ａ２００７４９９）；广州市科技攻关项目（２００７２３一Ｅ０３６１）；广州市医学科技基金（２００６－ＹＢ４）３０、２００８．ＹＢ－０３３）；广州医学院教学课题（０６８０４５）。作者筒介：周小棉，１９６４年生，男，理学博士，教授，主任技师。主要从事临床检验与管理，研究方向为毛细管电泳、芯片的研制与临床应用。万方数据　４３０临床检验杂志２００８年第２６卷第６期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２００８，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．６，２００各１５０Ｘｉ１００山５００Ｏ．ＯｌＯ．５１．０１．５２．０２．５３．０放置时间（１１）图１ＥＤＴＡ・ｌ（２对血小板计数的影响２．２丁胺卡那霉素对聚集血小板的解离效果两例患者的ＥＤＴＡ—ｋ的抗凝血，抽血后放置１ｈ内加入６．５ｍｇ／ｍｌ和１０ｍｇ／ｍｌ两种浓度的丁胺卡那霉素时，可以把凝集的血小板完全解离，形成单个散在分布，其血小板计数与抽血后即时检查（对照）的血小板计数相近（ｔ＜Ｏ，Ｐ＞０．０５）；而放置１．５ｈ后再加入丁胺卡那霉素的解离效果较差，不能把凝集块完全解离，血小板计数明显下降（ｔ＞１３．９，Ｐ＜０．０５），见图２、图３。两种浓度的丁胺卡那霉素效果相同。３Ｉ）（）０２５０巷２００Ｘ１５０ｉｔ００富５０Ｏ注：—●－未加丁胺卡那霉素，Ｉ抽血后Ｏ．５ｈ加丁胺卡那霉素，—－抽血后Ｉｈ加丁胺卡那霉素，—枷抽血后１．５ｈ加丁胺卡那霉素，※抽血后２ｈ加丁胺卡那霉素，◆抽血后２．５ｈ加丁胺卡那霉素。图２６．５ｍｇ／ｍｌ丁胺卡那霉素对患者ｌ血小板的解离７０喜ｓ０６０夏４０吾薰Ｏｈ抽血后至加丁胺卡那霉索的间隔时间注：◆未加丁胺卡那霉素，ｔ抽血后０．５ｈ加丁胺卡那霉素，★抽血后ｌｈ加丁胺卡那霉素，＋抽血后１．５ｈ加丁胺卡那霉索，—静抽血后２ｈ加丁胺卡那霉素，◆抽血后２．５ｈ加丁胺卡那霉素。图３６．５ｍｇ／Ｉｌｌｌ丁胺卡那霉索对患者２ｇ，／Ｊ，板的解离效果万　方数据２．３丁胺卡那霉素对血小板膜抗原和ＩｇＧ表达的抑制作用、在抽血后ｌｈ内加入丁胺卡那霉素对两患者血小板膜上ＣＤ６２ｐ、ＰＡＣ一１和ＩｇＧ的表达抑制作用最显著（ｔ≥１５．０６，Ｐ＜０．０１），而在抽血２ｈ加入药物时，对上述指标的影响无统计学差别。药物对血小板ＣＩＭＩ、ＣＤ６ｌ的表达无明显影响。３讨论ＰＴＣＰ是由于在ＥＤＴＡ盐抗凝血中ＥＤＴＡ诱导血小板中的特殊蛋白使血小板发生凝聚，当用全自动血液分析仪检测时，不能准确计数血小板，导致血小板发生假性减少的现象。我们探讨丁胺卡那霉素对ＥＤＴＡ．Ｋ：抗凝剂引起的血小板聚集的解离作用及其机制，结果表明，在抽血后１ｈ内加入高低两个浓度的丁胺卡那霉素能有效解离聚集的血小板，血小板计数与对照值无统计学差异，但１ｈ后加入丁胺卡那霉素不能有效解离血小板聚集，并且随着加入药物时间的延长解离效果越差，这与Ｓａｋｕｒａｉ等”】报道的３０ｍｉｎ内加入丁胺卡那霉素能有效解离，而１５０ｒａｉｎ加入则解离不理想的结果相符。说明在ＥＤＴＡ依赖性假性血小板减少患者抽取后１ｈ的抗凝血样本中加入６．５ｍｇ／ｍｌ丁胺卡那霉素能有效地锯离凝集的血小板，并可进行准确计数，同时不影响其他主要血常规参数的测定。ＥＤＴＡ可导致血小板活化，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团。有文献报道【６ｊ，ＰＡＣ．１是ＧＰＩＩｂ／１１１ａ活化后暴露的纤维蛋白原结合位点，即活化的ＧＰⅡｂ／Ⅲａ它是血小板活化早期的标志物；ＣＤ６２ｐ是血小板活化后期的标志物。流式细胞仪测定血小板膜表面活化早期和活化晚期标志物ＰＡＣ一１、ＣＤ６２ｐ和ＩｇＧ结果表明，在抽血后１ｈ加入丁胺卡那霉素与对照组或２ｈ加入药物的测定结果有显著差别，这表明丁胺卡那霉素能抑制血小板的活化，这可能是它能使ＥＤＴＡ—Ｋ：诱导的血小板凝集发生解离的原因。参考文献：［１］周小棉，邹晓．假性血小板减少症研究进展［Ｊ】．中华检验医学杂志，２００７，３０（９）：８８－９２．［２］巫小莉，周小棉。邓穗德，等．ＥｌＹｒＡ抗凝剂依赖性假性血小板减少症血小板计数的研究［Ｊ］．实用医学杂志［Ｊ］，２００７，２３（４）：５７８－５８０．［３］周小棉，巫小莉，李结秋，等．丁胺卡那霉素抑制和解离抗凝剂依赖的假性血小板聚集作用研究［Ｊ］．中华检验医学杂志。２００７，３０（３）：８８．９２．［４３ＣｏｈｅｎＡＭ，ＣｙｅｏｗｉｔｚＺ，ＭｉｔｔｅｌｍａｎＭ。甜以Ｔｈｅｉｎｅｉｄｅｎｃｅｏｆｐｓｅｕｄｏ－临床检验杂志２００８年第２６卷第６期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｔｈｒｏｍｂｏｐｅｙｔｏｐｅｎｉａｉｎａｕｔｏｍａｔｉｃｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２００８，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．６ｅｎｔ４３ｌｂｌｏｏｄａｎａｌｙａｅｒａ［Ｊ］．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａａｎｄｐｓｅｕｄｏｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ［Ｊ］．ＢｒＪＨａｅｍａｔｏｌ，１９９７，９９（４—１Ｉ）：（Ｂｕｄａｂ），２０００，３（２）：１１７—１２１．８１７－８２．ｐｒｅｖｅｎｔ［５］Ｓａｋｕｍｓ，Ｓｈｉｏｊｉｍａｌ。ＴａｎｉｇａｗａＴ，ｅｔ０２．Ａｍｉｎｏ￥１ｙｃｏｓｉｄｅｓ［６］郭楠，鲁静朝，崔炜，等．血小板活化标志物的研究进展［Ｊ］．Ｉ临床荟萃，２００６，２１（２３）：１７４８．１７４９．ｄｉｓｓｏｃｉａｔｅｔｈｅａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｏｆｐｌａｔｅｌｅｔｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＥＤＴＡ—ｄｅｐｅｎｄ・－ＤｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＥＤＴＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｓｅｕｄｏｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｂｙａｍｉｋａｃｉｎａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍＺＨＯＵＸｉａｏ－ｍｉａｎｌ，ＬＡＩＪｉｎ・ｔｉａｎ２，ＺＨＡＮＧＷｅｉ－ｈｏｎ９１，ＤＥＮＧＷｅｉ—ｘｉｏｎ９１（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇ－ｚｈｏｕＦｉｒｓｔＭｕｍｃｉｐＭＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａｌ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｏｌｌｅｇｅ，５１０１８０ＭｅｄｉｃＭＣｏｌｌｅｇｅ；２．ＦａｃｕｌｔｙｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＧｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）Ｘｉａｏ・ｍｉａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｕｘｉｍｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍＥＤＴＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｓｅｕｄｏｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｂｙａｍｉｋａｃｉｎａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｔｗｏｔｏＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＯＵＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．ＭｅｔｈｏｄｓｔｏＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＡｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｗｈｏｌｅｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｄｄｅｄｐｏｉｎｔｓ，ｔｗｏａｍｉｋａｃｉｎ（６．５ｓｕｂｊｅｃｔｓｗｉｔｈｍｇ／ｗ３ａｎｄ１０．０ｍｓ／ｎｆｌｌ）ｗｅｒｅＥＤＴＡ—Ｋ２ａｎｔｉ—ｃｏａｇｕｌａｔｅｄｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｂｙｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｕｎｔＥＤＴＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｓｅｕｄｏｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ．Ｔｈｅａｇ－ｇｒｅｇａｔｅｄ－ｐｌａｔｅｌｅｔｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＷａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｏｎａｎｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ．ＣＩＭｌ，ＣＤ６１，ＣＤ６２ｐ，ＰＡＣ－１，ａｎｄＩＳＧｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅＦＣＳｕｎｄｅｒｖａｒｉｏｕｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＷｈｅｎａｍｉｋａ－ｔｈｅｐｌａｔｅｌｅｔｓｏｆｔｈｅｔｗｏｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｏｆａｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｗｅｒｅｅｉｎ（６．５ｍｇ／ｍ１）ｗａｓａｄｄｅｄｃｏｕｎｔｓｗｉｔｈｉｎ１ｈｏｕｒａｆｔｅｒｂｌｏｏｄｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ｉｔｄｉｓｓｏｃｉａｔｅｄｔｈｅＥＤＴＡｉｎｄｕｃｅｄｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｐｌａｔｅｌｅｔ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