中性粒细胞碱性磷酸酶染色液使用说明

http://www.solarbio.com中性粒细胞碱性磷酸酶染色液使用说明货号：AB4117规格：20T/100T保存：2～8℃保存，有效期1年。产品简介：本染色方法为偶氮偶联法，在pH9.2～9.8的碱性环境下，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚ΑS-BI水解，生成α-萘酚，再以稳定的重氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀，定位于细胞浆中。供骨髓细胞涂片及血液细胞涂片作染色检查。产品内容：组成主要成份固定剂(Α液)甲醛偶氮溶液(B液)FBB盐亚硝酸钠溶液(C液)亚硝酸钠磷酸萘酚ΑS-BI溶液(D液)磷酸萘酚ΑS-BI核固红溶液(E液)核固红操作说明：新鲜的骨髓细胞涂片及血液细胞涂片。一、工作液配制：1.浸染工作液配制(一份浸染工作液量为43mL，至少可同时放置8-10张涂片）：http://www.solarbio.com(1)重氮盐溶液的准备:B液1mL与C液1mL彻底混匀，静置2分钟；(2)染缸（自备染液缸）内加入40mL蒸馏水；(3)将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀；(4)再加D液1mL入染缸内，轻轻混匀。2.3.4.滴染工作液配制(一份滴染工作液为2.15mL)。使用器材：一次性塑料试管、微量移液器、一次性吸嘴、滴管。操作：取B液50μL、C液50μL、混匀，静置2分钟；再加蒸馏水2mL，加D液50μL混匀。二、染色步骤：1、干燥涂片，滴加Α液(用前恢复室温，并充分摇匀)固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，甩干；2、滴加或浸入工作液15分钟，蒸馏水冲洗，甩干；3、E液（使用前请务必摇匀！）复染1～2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检；4、计算积分：反应结果以积分值报告，油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别记录其分级情况，所有阳性细胞积分相加即为积分。如：分级（-）0分（+）1分（++）2分（+++）3分（++++）4分总和参考范围：阳性反应主要见于成熟中性粒细胞(杆状及分叶核粒细胞)中，健康成人一般的中性粒细胞碱性磷酸酶积分值为13～130，但各个实验室条件各异，实验室应有自己的参考值。中性粒细胞数量121840228100个中性粒细胞积分018806632196分http://www.solarbio.com染色结果：NΑP阳性颗粒为蓝色。判断标准：（-）0分：细胞浆中无阳性染色颗粒。（+）1分：细胞浆中含少量颗粒或呈弥漫浅蓝色。（++）2分：细胞浆中含中等量的颗粒或呈弥漫蓝色。（+++）3分：细胞浆中含较多颗粒或呈弥漫较深蓝色。（++++）4分：细胞浆中充满粗大颗粒或呈弥漫深蓝色。注意事项：1、仅限于形态学染色观察使用。2、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B、C液请充分混匀，所用容器必须洁净，工作液颜色为金黄色。3、应采用新鲜涂片做NΑP染色，放置过久则酶的活性会降低。4、工作液配制后应在10分钟以内使用。5、需用感染发热病人或正常人外周血涂片作为阳性对照。6、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果。