实验室操作管理规则

1.每位实验员应自觉维持实验室秩序，不大声喧哗，小心实验仪器。 2.实验员在实验前必须确保已经做好充分的准备，否则不准开始实验。

3.实验过程中应严格按照操作规程进行实验，并把实验结果、数据及时如实记录。 4.实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐，公用药品使用后应立即盖严 放回原处，勿使实验室试剂、药品洒在台面或地上。实验完毕后应将仪器洗净， 台面擦洗干净。

5.使用仪器、药剂、药品等各种物品时必须注意节约。洗涤和使用仪器时，应小 心仔细，防止损坏仪器。使用精密贵重的仪器时，应严格遵守操作规程，发现 故障须立即向负责人报告。

6.实验室内严禁吸烟！实验员应谨慎使用、存放易燃药物，切实做好防火，防漏 等安全工作。

7.废液体可倒入水槽内，强酸、强碱溶液必须先用水稀释。废纸屑及其他固体废 物和带渣滓的废物倒入废品缸内：不能倒入水槽或到处乱扔。

8.要精心使用和爱护仪器，如果仪器损坏时，应如实向负责人报告，做好登记。 9.实验室内一切物品，未经本室负责人批准，严禁带出实验室，借物须办理登记 手续。

10.最迟离开的实验员必须关掉所有仪器电源（冰箱除外），整理好试剂、药品， 关门后离开。

1 MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL），加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／L

NH4NO3

KNO3

CaCl2·2H2O

MgSO4·7H2O

KH2PO4

微量元素(母液Ⅱ)

KI

H3BO3

MnSO4·4H2O

ZnSO4·7H2O

Na2MoO4·2H2O

CuSO4·5H2O

CoCl2·6H2O

铁盐(母液Ⅲ)

FeSO4·7H2O

Na2-EDTA·2H2O

33 000 38 000 8 800 7 400 3 400 166 1 240 4 460 1 720 50 5 5 5 560 7 460 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA

肌醇 20 000 ⅣB

烟酸 100

盐酸吡哆醇(维生素B6) 100

盐酸硫胺素(维生素B1) 100

甘氨酸 400

以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、6-苄基嘌呤（6BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（0.1 mg/mL）。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量（1 mL）无水乙醇预溶，将6BA用少量（1 mL）的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。

配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。

配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以

免出错。

溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。

调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（5.4～7.0）测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止（培养基的pH必须严格控制在5.8）。

2 BA为细胞分裂素 NAA 是萘乙酸，为生长素的一种 3 适于百合根的激素暂时没找到

以下是叶片和胚的激素：对麝香百合 (LiliumlongiflorumThunb)叶片进行离体培养 ,可成功获得无菌苗。试验结果表明 :培养基MS +BA 0 1mg/L +NAA 1 0mg/L适于初代培养 ,有助于根和芽的分化 ;MS +BA 0 5mg/L +NAA1 5mg/L适于增殖培养 ,利于愈伤组织的产生 ,并促进芽的分化 ;生根培养基为 1/ 2MS +NAA 1 0mg/L +多效唑 10 0mg/L ;当试管苗根长 1cm时移栽易成活

在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH的 MS培养基上培养 ,蔗糖含量为 6 %～ 8%时 ,百合幼胚胚性生长最好 ,培养 30 d后可以得到正常胚 .在含有 0 .1 m g/ L NAA,1 m g/ L BA的 MS培养基上可以形成淡绿色的愈伤组织 ,将这些愈伤组织转移到 1 / 2 MS无激素的培养基上培养可以形成大量的不定芽 ,不定芽生根移栽后 ,其成活率可达90 %以上